分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

34招教你学会实验室常用贮存液的配制技巧(一)

2019.10.08
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

  1 30%丙烯酰胺溶液

  『配制方法』

  将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中. 加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml.用0.45μm孔径滤器过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

  〖注意〗

  丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性. 称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具. 可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作. 因为它还可能会含有少量未聚合材料. 有些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后过滤以纯化之(建议使用Whatman 1号滤纸过滤,鸿跃公司有售). 在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸.

  2 40%丙烯酰胺

  『配制方法』

  把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中. 继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L.

  〖注意〗

  见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定.

  3 放线菌素D溶液

  『配制方法』

  把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值. 放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃.

  〖注意〗

  放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤.

  另,药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂. 只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用.

  4 0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

  『配制方法』

  在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃.

  5 10mol/L乙酸酰溶液

  『配制方法』

  把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌.

  6 10%过硫酸铵溶液

  『配制方法』

  把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周.

  7 BCIP溶液

  『配制方法』

  把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃.

  8 2×BES缓冲盐溶液

  『配制方法』

  用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃.

  9 1mol/L CaCl2溶液

  『配制方法』

  在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl26H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃.

  〖注意〗

  制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃.

  10 2.5mol/L CaCl2溶液

  『配制方法』

  在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl26H2O ,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃.

  11 1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液

  『配制方法』

  用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃.

  〖注意〗

  DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理.

  12 脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

  『配制方法』

  把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃.


互联网
仪器推荐
文章推荐