微量全血培养
人淋巴细胞染色体标本制备
肿瘤细胞的染色体标本制备
人体染色体常规核型的分析
实验方法原理 | 采用微量全血培养人体外周血中淋巴细胞,在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素,破坏细胞纺锤体的形成,使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞,低渗处理,使细胞胀大,染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋白质,使染色体清晰且分散良好。再结合离心技术去掉红细胞碎片,然后采用空气干燥法制片获得中期染色体标本。 |
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实验材料 | 外周血 |
试剂、试剂盒 | 640培养液 肝素溶液 秋水仙素 胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇 冰醋酸 Giemsa原液 磷酸缓冲液 生理盐水 |
仪器、耗材 | 超净台 镊子 离心机 水浴箱 天平 离心管 显微镜 载玻片 平皿 |
实验步骤 |
1. 打开超净台紫外灯20~30分钟。
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注意事项 |
试剂配方 500 单位/ml 的肝素溶液 10μg/ml 的秋水仙素溶液 0.25%胰蛋白酶一 0.02%EDTA 混合消化液 0.5mg/ml 的 PHA 溶液 0.075mol/L 的 KCl 溶液 磷酸缓冲液(pH6.8)
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其他 |
1.人体外周血中淋巴细胞是成熟的免疫细胞,正常情况下处于 G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin,植物血凝素)是人和其它动物淋巴细胞的有丝分裂刺激剂,它能使处于 G0 期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞,进入细胞周期开始旺盛的有丝分裂。 2.人体染色体常规核型的分析,在今天的染色体研究水平上作为染色体结构异常的疾病诊断已经失去意义,但对染色体数目异常仍具有诊断上的价值,尤其是起着分析其它几种显带核型的桥梁作用。通过常规核型的分析必须掌握三点:(1)会分组;(2)了解各组染色体的基本形态特征;(3)会计数数目和鉴定性别。
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