实验方法原理 | 在 25 ml 缧口盖离心管中加人6 ml Ficoll-Hypaque溶液,将 9 ml 含 2×107 个细胞的培养基加在上面,离心,从交界部位收集活细胞。 |
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实验材料 | 细胞悬液 D-PBSA |
试剂、试剂盒 | Ficoll-Hypaque溶液或其他类似物 |
仪器、耗材 | 离心管或常规容器 生长培养基 注射器 移液管 细胞计数器 离心机 |
实验步骤 | 1. 让悬液中大的组织团块沉降。 2. 把 9 ml 的细胞悬液(细胞团尽量少)加在6 ml 的Ficoll (Ficoll/metrizoate 调至 1.077 g/ml)泛酸溶液上面,此步骤应在广口、透明有盖的离心管中进行,如 25 ml 无菌离心管或Nunclon 普通容器(清澈光亮的离心管或常规容器),或 Corning 50 ml 透明的塑料管,体积应两倍于上述溶液的体积。 3. 400 g (在界面中间测量),离心15 min 。 4. 小心吸去上层液体勿破坏界面。 5. 用注射器(带有钝的插管或平针头)或巴斯德吸管或移液器小心收集交界面液体。 6. 用培养基(如 DMEM/F12 , 含1 0 % 胎牛血清)将混合液稀释至 20 ml。 7. 混合液以 70 g 离心 10 min。 8. 去除上清液,用 5 ml 生长培养基重悬细胞小团。 9 . 重复步骤 7 和 8 使细胞不含密度培养基。 10. 用血球计数板或电子计数仪计数细胞。 11. 接种至培养瓶中培养。 |
注意事项 | 使用人的或其他灵长类的材料,不要用尖针或玻璃巴氏吸管。 |