分离核仁
从人肝脏或胎盘组织中分离核仁
HeLa细胞细胞核或核仁的制备
高镁法分离核仁
实验材料 | 肝脏 |
---|---|
试剂、试剂盒 | NKM |
仪器、耗材 | 粗孔滤纸 Teflon-玻璃匀浆器 |
实验步骤 | 1. 制备溶液: NKM:0.13 mol/L NaCl,5 mmol/L KCl,8 mmol/L MgCl2 0.34 mol/L 蔗糖,3 mmol/L MgCl2 2.3 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl2 0.34 mol/L 蔗糖,0.05 mmol/L MgCl2 0.88 mol/L 蔗糖 2. (可选)用冰冷的 NKM 溶液灌注肝脏。 3. 称组织重量,用剃刀或剪刀切成非常小的碎块,或者用组织压挤器进行压挤。 4. 每克组织加 10 倍体积的含 0.34 mol/L 蔗糖和 3 mmol/L MgCl2 的溶液进行匀浆破碎细胞。 5. 匀浆通过 4 层粗孔滤纸以去除结缔組织。 6. 4℃,500 g 离心 10 分钟。 7. 用紧密结合的 Teflon-玻璃匀浆器匀浆使细胞核粗品重悬浮于 10 倍体枳(每克起始组织)的含 2.3 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl2 的溶液中。 8. 40000 g 离心 1 小时沉淀细胞核。 9. (可选)温和地将细胞核沉淀重悬浮于 0.5 倍体积的含 0.34 mol/L 蔗糖,0.25% (w/v) Triton X-100 和 5 mmol/L MgCl2 的溶液中,500 g 离心 10 分钟得到沉淀。 10. 将细胞核重悬浮于 0.16 倍体积的含 0.34 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl2 的溶液中。 11. 超声处理细胞核悬液 4 次,每次大约 10 秒钟。 12. 在超声处理过的细胞核下面加一层含 0.88 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl2 的溶液,2000 g 离心 30 分钟。 13. 收集核仁沉淀。 |