ELISA试验操作中留意事项总结

因为 ELISA(酶联免疫试验)具有灵敏度较高、特异性好的特色，在科研范畴遭到广泛喜爱。虽然洗板仅仅ELISA试剂盒试验重要环节中的一个，但作为专业的洗板机生产厂家，我们有必要对影响ELISA试验成果各要素有一定的了解，良好的仪器和正确的操作是确保ELISA 检测成果牢靠的必要条件。如不留意，就易呈现白板、花板、色弱和假阳性等现象。尤其是花板现象（就是空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔成果正常，而标本孔的OD值却显着偏高）是各个厂家洗板机调试中常常遇到的问题。现将ELISA试验操作中留意事项总结如下，以期给大家带来一些启发。

标本及收集、贮运要素

严峻溶血，以 HRP为符号的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色形成假阳性； 混有红细胞的血清易沉积或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染 ，菌体中或许含有内源性HRP，也会发生假阳性反应；标本凝结不全 ，有时为了争取时刻快速检测，常在血液还未开端凝结时即强行离心别离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块，易形成假阳性成果；采血试管洗刷不彻底 、重复运用易穿插污染； 塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降形成假阴性。

血清标本宜在新鲜时检测，严峻溶血标本禁用。一般说来，在 5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时刻过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻住血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免发生气泡。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。重复冻融会使 抗体 效价跌落，所以测 抗体 的血清标本如需保存作屡次检测，宜少数分装冰存；应该运用一次性玻璃试管或真空管采血管；并运用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会添加OD值，或许与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶符号物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA体系中辣根过氧化物酶活性；血液标本收集后有必要使其充分凝结后再别离血清，或标本收集时用带别离胶的采血管或于采血管中加入恰当的促凝剂。