实验zui常见问题解答:
问:做直接Elisa法检验小鼠血清中的IgE抗体,设空白对照、和阴性对照、阳性血清稀释倍数为5千、1万、10万、20万不等,用的是生物素符号的羊抗鼠IgE抗体,和亲和素的辣根过氧化物酶。可是效果除了空白对照孔没有颜色外,其他各孔全有颜色,而且OD值都相差不大,为什么?
答复:或许原因如下:
(1) 水质被金属离子等污染;防止办法尽量运用新鲜水或蒸馏水。
(2) 洗刷不充分,样品中其它成分残留或酶残留;防止办法洗刷液应注满微孔,充分洗刷。
(3) 移液头重复运用,未洗净或消毒不完全; 防止办法移液头zui好一次性运用。
(4) 酶标板灵敏度过高。
(5) 一抗显色时间的操控等等,关于ELISA的每一步都要留心才行。
96T 检测84个样本,12孔用于制造标准曲线
48T 检测42个样本,6孔用于制造标准曲线
(1)用一张写满字的纸,字越多越好,比如报纸,垫在下面,这样,加过标本的小孔看过去下面的字会变小,没加的字正常,非常简略差异。
(2)可以使用液面反光与没有加的孔加以差异
(3)在标本加完后,再把加样枪全压下,使液面发作小气泡,也可以加以差异