大鼠ELISA试剂盒检测系统可谓是免疫学反应应用到科研出产中zui为广泛zui为敏捷的技术手段。自己也为此苦恼过很长一段时间,跟着自己技术水平得进步,或多或少地也把握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做大鼠ELISA试剂盒已是轻车熟路了,以前检测一种抗体用整整一下战书还算得晕晕的,现在给我十个八个的从包被到显色,一个工作日基本搞定。可是在新老手操纵过程中老是会泛起或大或小的题目,本人在刚开始做ELISA时就面对良多灾题,固然有师兄师姐铺路,但仍是经常做得乌烟瘴气,好比说花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空缺还低。
操作步骤
①兔抗人IgG 作为抗原,用包被液l:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。
②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。
③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h。
④洗涤:用洗涤液洗3次。
⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS 连续稀释(按照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS或空白培养基作为阴性对照,大鼠ELISA试剂盒已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育 1~2h。
⑥洗涤:用洗涤液洗3次。
⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用封闭液l :8000稀释,100μL/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。
⑧洗涤:用洗涤液洗5次,蒸馏水洗2次。
⑨显色:加新鲜配制的底物溶液100μL/孔,室温暗处放置5~30min,显示蓝色。
⑩终止反应、比色:加50μL/孔终止液。颜色变黄;大鼠ELISA试剂盒用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值,阳性反应的zui大稀释度为待测样品的效价。