毛细管等电聚焦电泳仪(CIEF)是根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。
一、分离机理:
毛细管内充有两性电解质载体(合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物),阳极端装稀H3PO4溶液,阴极端装稀NaOH溶液。当施加直流电压(6~8V)时,管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度。在电场作用下,蛋白质在此pH梯度中泳动,当迁移至pH值等于pI处时不再泳动,而被浓缩成狭窄的区带。
CIEF是在毛细管中进行等电聚焦,关键是减小电渗流,找到使分离区带迁移的办法。
运行步骤包括进样、聚焦和迁移等。
二、特点:
1、具有极高的分辨率,可分离ΔpI<0.01pH单位的两种蛋白质。
2、由载体两性电解质作为载体。
三、应用:
1、可用于分离不同等电点的两性大分子,尤其在分离蛋白质方面显示了较大的优越性。
2、除用于测定pI外,还可用于分离其它方法无法分离的蛋白质,如免疫球蛋白、血红蛋白、血清转铁蛋白和低浓度生物样品。