等电聚焦电泳色谱仪固相pH梯度的介质是Immobilines试剂,不是两性分子,在凝胶聚合时便形成pH梯度,不随环境电场条件的改变而改变。Immobilines试剂的分子式为CH2 = CH-CO-NH-R,其中R代表羧基或第三氨基,每个分子都有一个单一的酸性或碱性缓冲基团与丙烯酰胺单连。
分子一端的双键可在聚合过程中共价键合镶嵌到聚丙烯酰胺介质中,是固相的,即使是在电场中也不会漂移。
分子另一端的R基团为弱酸或弱碱性的缓冲基团,利用缓冲体系滴定终点附近一段pH范围,可形成近似线性分布的pH = 3~10的缓冲体系。
通过这种方式形成的固相pH梯度胶条不会发生电渗作用,可进行特别稳定的等电聚焦电泳分离。