如果实验室具备一定条件,可以自行填充液相色谱仪色谱柱,填充方法主要有干法和匀浆填充法。
一、干法:
原则上粒径大于20um的固定相可采用此法装柱。
具体方法是将固定相通过漏斗加入到垂直放置的色谱柱管中,同时敲打或振动柱管,以得到填充紧密而均匀的色谱柱。
二、匀浆填充法:
匀浆填充法装柱又称湿法装柱,无论大粒径还是小粒径固定相均可采用此法装柱。
1、根据使用匀浆试剂的性质可分为:
(1)平衡密度法:
使溶剂密度和填充颗粒密度相近,此时颗粒沉降速度趋于零。
常用匀浆试剂有四氯乙烯和四溴乙烷等。
(2)非平衡密度法:
采用粘度较大的试剂,如CCl4、CH3OH、丙酮、二氧杂环已烷和THF等。
2、具体方法:
填充时,按上述方法制作匀浆液,用流动相充满色谱柱及其延长管中,然后将匀浆液倒入匀浆填充器,在较高压力下迅速将其注入色谱柱内。要求填充速度快(防凝聚、沉降或结块)且无空气进入(影响填充均匀性)。
匀浆填充法的关键是匀浆液的制备,并需要一台性能优良的大流量泵。