减小色谱柱的尺寸规格
通常在HPLC分析中,经常使用直径4.6mm的柱子。而在保持分离度不变的条件下,通过减小色谱柱的尺寸可减少流动相的消耗量。从图4中可以看出,流动相的消耗量将随着色谱柱内径的减小而相应减少,具体如下所示:
4.6 mm I.D.→3.0 mm I.D.→2.0 mm I.D.
100%→43%→19%。
尽管2mm内径的色谱柱只适合用于半微量高效液相色谱系统, 但是3mm内径的色谱柱可用于常规的液相色谱系统,因此使用3mm内径的色谱柱可以作为减少流动相用量的方法之一。
而且减小色谱柱的内径还可以增加峰高度和提高灵敏度。当使用3mm色谱柱时,进样量仅为4.6mm柱的40%就可以达到与4.6mm柱相同的峰高度。
图4. 不同内径色谱柱对溶剂用量的影响。
色谱条件如下:
色谱柱:TSKgel ODS-100V 3μm;(4.6 mm I.D.×15cm);(3.0 mm I.D.×15cm );(2.0 mm I.D.×15cm)。
流量:1.0 ml/min(4.6 mm I.D.); 0.43 ml/min(3.0 mm I.D);0.19 ml/min(2.0 mm I.D.)。
检测器:UV;检测波长:254 nm;柱温:40℃。
进 样:5μl(4.6 mm I.D.);2μl(3.0 mm I.D.);1μl(2.0 mm I.D.)。
样品:1. 苯酚(40 mg/L);2. 邻苯基苯酚(5 mg/L);3. 萘(20 mg/L);4. 联苯(5 mg/L)。