可能致因
预防措施/解决方案 | |
减少保留时间 | |
键合固定相的损失 (流失) |
|
固定相上的(存在)活性基团 |
|
增加流量 (流速) |
|
柱超载 (色谱柱过载) |
|
延长保留时间 | |
改变流动相的成分 |
|
键合固定相的损失 (流失) |
|
减少流量 (流速) |
|
流动相中存在气泡 |
|
波动保留时间 | |
柱平衡(色谱柱平衡时间)不足 |
|
流动相成分的变化 |
|
缓冲能力不足 |
|
波动柱的温度 (柱温波动) |
|
2. 保留变量(时间变动)
如果所有峰(色谱峰)的保留时间均发生了变化,其致因很可能是如下因素发生了变化:流动相的组成、色谱柱的化学性质、色谱柱的温度或流速。
如果等度或梯度流动相在在线式混合中出现错误,也可能导致保留时间出现问题。
下面将简要介绍这些问题来源(对上述每个原因都简述如下)。
2.1.如果操作人员操作不当,则会导致流动相组成的意外变化,例如使用在线式混合系统时,流动相混合物(系统)设置不正确;或替换新批次流动相时,未妥善制备新的流动相(新流动相配制不正确)。
在极少数情况下,会出现流动相组分选择性损失的情况,例如蒸发。
当流动相发生变化时,峰形(色谱峰)通常会向相同的方向移动,以缩短或延长保留时间(保留时间变长或变短);而相对保留(选择性因子,a)通常会发生变化。
检查流动相组成错误的最佳方法是仔细检查(复查)系统设置;如有必要,应制备新的流动相。
方法文件应包含特定流动相变化影响的相关信息。例如,有机溶剂或pH值的微小变化会对色谱图产生特征(在色谱图体现出特征性的)影响,如分辨率或保留的变化(分离度的变化或保留时间的漂移)。
如果您怀疑设备出现故障,请将色谱柱和流动相移至另一个HPLC系统,然后再次运行。
如果问题依然存在,则问题在于流动相或色谱柱;如果问题不再出现,则可能与其他系统组件或参数相关。
2.2.色谱柱化学(化学性质)变化会在色谱柱的整个生命周期内出现,并且一般会在数周或数月内逐渐变化。柱老化一般伴随着柱背压的上升、保留时间的逐渐变化(漂移)(更长或更短)以及更多的峰拖尾。
更换新柱以确定是否是柱老化导致的问题(可确证色谱柱老化)。
500-2000次注射(进样)的柱寿命是较为理想的;在这一点上,柱成本相较于整体分析,是十分微小的,所以更换新柱的可行性较高(色谱柱在整个分析的成本中所占比例低,因而可以合理更换色谱柱)。
如果色谱柱的使用寿命过短,应仔细检查操作条件,以确保它们适用于该色谱柱。
图5显示了在极端操作条件下,色谱柱寿命较短的示例(缩短的寿命)