酵母β-葡聚糖含量化学比色法定量检测试剂盒产品使用说明
主要用途
YIJI 酵母β-葡聚糖含量化学比色法定量检测试剂是一种旨在通过染料刚果红与β-D-葡聚糖结合沉淀，产生吸光峰值的变化，来测定样品中β-葡聚糖浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种培养酵母菌种β-葡聚糖的含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
β-D-葡聚糖（β-D-glucan）是一种葡萄糖单体通过β-1,3或β-1,4主链和β-1,6侧链上的糖苷键（glycosidic bond）链接而成的多聚体葡萄糖分子，普遍存在于植物中纤维素（cellulose）、谷粒外皮、以及藻类、真菌、酵母、蘑菇或细菌的胞壁等。其中β-1,3-D葡聚糖更为常见，具有生物活性和药物特性，包括免疫刺激、抗炎、抗菌、抗传染、抗癌、降低胆固醇、放射线的保护及伤口愈合等活性。β-D-葡聚糖的测定包括苯酚-硫酸法、刚果红法、苯胺蓝法和酶连续反应法等，其中刚果红法作为比色定量技术，操作非常方便。基于β-D-葡聚糖，与刚果红（Congo red；benzidinediazo-bis-1-naphthylamine-4-sulfonic acid）反应产生沉淀复合物，呈现吸光峰值的降低（波长540nm），由此定量测定β- D-葡聚糖的含量。
产品内容
YIJI 萃取液（Reagent A） 毫升
YIJI 稀释液（Reagent B） 毫升
YIJI 反应液（Reagent C） 毫升
YIJI 标准液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 YIJI 标准液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4冰箱里；YIJI反应液（Reagent C）避免光照；有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于标准液配制或反应的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
电炉：用于煮沸孵育
比色皿或酶标板：用于染色后比色检测的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
样品准备
准备好5毫升待测的新鲜酵母细胞（OD600＝1.0，即1 X 108细胞/毫升）
移入到15毫升锥形离心管
放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
小心抽去上清液
加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
涡旋震荡15秒
煮沸水浴里孵育5分钟
涡旋震荡15秒
加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
涡旋震荡15秒
放进台式离心机离心10分钟，速度为1000g
小心抽去上清液
加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
涡旋震荡15秒
放进台式离心机离心10分钟，速度为1000g
小心抽去上清液
加入xx毫升YIJI 稀释液（Reagent B），混匀
置于冰槽里备用
测定准备
准备好待测样品，置于冰槽里
设定好分光光度仪或酶标仪（温度为25℃）：波长540nm，并置零
准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
按照下表配制标准液
将1至5号管置于室温下备用；标准管浓度见下表
|
管号 |
YIJI 稀释液（Reagent B） |
YIJI 标准液（Reagent D） |
标准葡聚糖含量 |
|
1 |
―― |
xx微升 |
xx微克 |
|
2 |
xx微升 |
xx微升1号管 |
xx微克 |
|
3 |
xx微升 |
xx微升2号管 |
xx微克 |
|
4 |
xx微升 |
xx微升3号管 |
xx微克 |
|
5 |
xx微升 |
0 |
0 |
标准曲线测定
加入500微升上述配制的标准液到1.5毫升离心管
加入xx微升YIJI 反应液（Reagent C）
涡旋震荡15秒
放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
小心移取上清液到比色皿或酶标板
即刻放进分光光度仪检测：获得相对吸光读数
重复实验步骤1至6四次
构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对吸光单位；横座标（X轴）为标准葡聚糖含量（微克）
样品测定
加入500微升上述制备的待测样品到1.5毫升离心管
加入xx微升YIJI 反应液（Reagent C）
涡旋震荡15秒
放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
小心移取上清液到比色皿或酶标板
即刻放进分光光度仪检测：获得相对吸光读数
根据标准曲线获得样品对应葡聚糖含量
计算样品浓度
注意事项
本产品为25次操作，包括标准样
本产品检测范围是100至300微克葡聚糖
操作时，须戴手套
比色测定后，比色皿须清洗彻底
如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
本公司提供系列葡聚糖检测相关试剂产品
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