使用SpectraMax M5e读板机进行HTRF cAMP dynamic 2和IP-One检测 三

仪器设置

波长、延迟和整合设置都已针对基于双单色器的SpectraMax M5e读板机进行了优化。尤其注意，XL665/d2的最佳发射波长为668nm而非HTRF产品信息中所说的665nm。

结果

最佳结果来自基于细胞的cAMP测定，其使用384-孔微孔板并以每孔大约4,000CHO-M1细胞接种(40 μL检测终体积)。最优细胞密度根据细胞类型和特定测定条件可能改变。用福斯高林处理细胞一小时后，获得关于EC50为11.4 μM和Z’ 因子为0.86的剂量应答曲线(图1)。使用Cisbio比值方程计算的Delta F%值范围从47到707(表2)，与观察到的cAMP标准曲线(图2，表3)相似。

在基于细胞的IP-One测定中，优化的细胞密度为384-孔微孔板每孔10,000个CHO-M1细胞(40 μL最终测定体积)。碳酰胆碱刺激一小时得到的EC50为0.64 μM和Z’ 因子为0.91的剂量应答曲线(图3)。使用Cisbio比值方程计算的Delta F%值范围从3402到12539(表4)。

根据IP-One HTRF产品说明书直接准备的IP1标准品生成的校准曲线其Z’ 因子为0.84(图4)且Delta F%值范围从820到11883(表5)。

总结

具有HTRF认证的SpectraMax M5e多功能微孔板读板机多功能微孔板读板机提升了双单色器系统和多模式检测功能灵活性，扩展了研究者们的检测方法范围。当在SpectraMax M5e读板机上运行IP-One和cAMP HTRF测定时，展示了非常宽的动态范围和范围从0.78到0.91的完美Z’ 因子。使用SoftMax Pro软件的预设HTRF实验模板大大简化了数据分析。

参考

1. TR-FRET Basics (www.htrf.com)
2. Zhang, J. H., Chung, T. D. Y., and Oldenburg,K. R. (1999). A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays. J. Biomol Scrn 4(2): 67-73.
3. cAMP dynamic 2 HTRF kit package insert(Cisbio international, France).
4. IP-One HTRF kit package insert (Cisbio international, France).