GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒使用说明

主要用途

YIJI GST融合蛋白同位素（[γ³²P]ATP）激酶标记试剂是一种旨在使用同位素（[γ³²P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白，成为敏感探针的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种GST融合的重组蛋白。其应用于后续远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验和印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，重复性好。

技术背景

谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione-S-transferase；GST）融合蛋白（fusion protein）的技术，广泛应用于蛋白与蛋白之间相互作用的研究、抗体的制造和纯化、以及生化分析。基于GST融合蛋白由GSTmoietry、蛋白酶切离部位和已知激酶磷酸化部位构成，使用同位素（[γ³²P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白，作为敏感的探针，在远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验或印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验中，探测和分析结合蛋白或多肽结构域。GST融合蛋白同位素（[γ³²P]ATP）激酶标记是蛋白组学研究的常用工具。

产品内容

YIJI缓冲液（Reagent A）  毫升

YIJI标记液（Reagent B）       微升（用户自备）

YIJI反应液（Reagent C）       微升

YIJI酶促液（Reagent D）  微升

产品说明书       1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

[γ³²P]ATP 同位素：用于同位素标记

1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器

干式恒温仪：用于标记孵育

液体闪烁计数器（liquid scintillation counter）：用于同位素活性测定

实验步骤

• 准备好纯化的GST融合蛋白

• 移取xx微升YIJI缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管

• 加入2.5微升用户自备的GST融合蛋白（总量为10微克）

• 加入xx微升YIJI标记液（Reagent B）（注意：同位素总量为10毫居里/毫升；5000居里/毫摩尔）

• 加入xx微升YIJI反应液（Reagent C）

• 加入xx微升YIJI酶促液（Reagent D）

• 枪头上下抽吸混匀

• 放进30℃干式恒温仪孵育30分钟

• 放进-70℃保存或置于冰槽里备用

• 或使用5至10微升（10⁷CPM）标记蛋白继续后续远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验和印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验等

注意事项

• 本产品为20次操作

• 本产品的标记效率可达60%以上

• 操作时，须戴手套

• 操作时，严格无菌

• 同位素操作须严格遵守规章制度

• 建议使用带滤芯的枪头进行操作

• 同位素[γ³²P]ATP（1居里=37GBq），建议使用ICN或AMERSHAM（安玛西亚）公司

• 由于[γ³²P]同位素的半衰期短，建议使用新鲜同位素材料；且标记后即刻使用

• 可以直接在GST融合蛋白树脂上进行标记，然后常规洗脱或凝血酶（THROMBIN）切离纯化；纯化后进行同位素活性测定

• 本公司提供系列同位素处理试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定

• 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶