3 结果分析
3.1 筛选定量肽段
首先使用Q-Exactive 对人重组干扰素α-2b 标准品的酶解肽段进行Full MS/ddMS2 扫描，上样量为500ng（不计酶解损失），筛选人重组干扰素α-2b 的unique peptide，该肽段必须为人重组干扰素α-2b 所特有的肽段，才可以用于表征人重组干扰素α-2b 的量。
下图展示的为人重组干扰素α-2b 色谱质谱的原始图，图中可见，整个色谱峰分离比较均一，强度比较高。
将上述得到的原始文件使用Byonic 软件进行搜库处理，观察蛋白质的序列匹配度，数据库使用DrugBank 下载的人重组干扰素α-2b 的氨基酸序列。
从上述表格可见，人重组干扰素α-2b 的氨基酸序列匹配度达到了98.18%，说明Q-Exactive 的超高灵敏度，在不到500ng 的上样量的情况下可以对蛋白质进行高氨基酸序列匹配度的分析，对于后续数据分析的可靠性非常重要。
下图展示的是人重组干扰素α-2b 的具体氨基酸序列匹配情况。图中绿色标记的氨基酸序列为鉴定到的氨基酸，红色标记的为鉴定到的带有修饰的氨基酸，黑色标记的为实验中没有鉴定到的氨基酸。
从上述图中可以看出，165 个氨基酸中只有最后三个氨基酸没有被鉴定到，分析发现162 位的氨基酸为R，因而在Trypsin 的酶解中会被切割，产生的肽段为最后三个氨基酸，该肽段过短，不适于质谱检测。
从上述的色谱质谱原始图中可以看出在洗脱时间为36.28min，m/z 为451.75 的色谱峰其强度最高， 搜库
结果显示该色谱峰为人重组干扰素α-2b 的unique peptide“EDSILAVR”，下图展示的是EDSILAVR（m/z 451.75）的母离子色谱质谱抽提峰及其二级谱图，
下图为上述的肽段EDSILAVR 二级谱图的解析情况，图中可见所有的y 系列离子均被鉴定到，子离子的实测m/z 与理论m/z 偏差均在10-3 水平，谱图质量非常高，结果非常可信。另外，从二级谱图中可以看出，二级碎片子离子y4 ，m/z 458.31，其强度最高，因而在随后的数据分析中选取451.75- 458.31 这一母离子- 子离子对来表征EDSILAVR的含量，进而表征人重组干扰素α-2b 的含量（该方法即为选择反应监测技术：SRM Selected Reaction Monitoring）。
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