第三步:检测什么样本?试验周期多长?
如需要检测的是尿液,柠檬酸盐血浆样本,需在订购前仔细查看ELISA试剂盒说明书中的验证样本。简单的说,如果ELISA试剂盒是没有用过试剂盒检测尿样,柠檬酸盐血浆,使用该试剂盒检测尿样会存在极大的风险;而且很多ELISA试剂盒中还会特别说明“不能检测柠檬酸盐血浆”。Vplex试剂盒验证过的样本有血清,
EDTA血浆,肝素血浆,柠檬酸盐血浆,尿液,细胞上清液。
如自己采购抗体,开发ELISA方法学,如遇到抗体亲和力低,由于ELISA的两次洗脱将可能将抗体洗掉,大大影响实验结果。Meso Scale Discovery® 可以不用洗,2.5小时完成实验的一步法。
如实验研究周期较长,ELISA试剂盒尽量选择一个批次的,以防止不同批次间的差异。然而由于普通ELISA有效期在3-12个月,而实验周期往往在1-2年以上,一些长期临床实验项目甚至在5-10年,因而经常面临不同批次的挑战。而Meso Scale Discovery®Vplex试剂盒经过54个月稳定性测试。使用Vplex,完全可以用一个批次支持2-3年的实验。更多细节可以比较下表格:
Meso Scale Discovery® 超敏Vplex试剂盒 |
普通ELISA试剂盒 |
|
试剂盒验证过的样本 |
血清, EDTA血浆,肝素血浆,柠檬酸盐血浆,尿液,细胞上清液 |
血清, EDTA血浆,肝素血浆,细胞上清液 |
实验流程 |
可以免洗,无需洗板,2.5小时 |
需要洗2次,6小时以上 |
验证 |
灵敏度,准确度精确度,基质效应和不同类型样本,特异性,54个月稳定性测试 |
灵敏度,准确度精确度,基质效应和不同类型样本,特异性 |
试剂盒检测稳定性数据 |
54个月稳定性测试,3次冻融测试。 |
无。有效期在3-12个月。 |
校正数据 |
使用NIBSC/WHO对照 |
只有高端试剂盒才使用NIBSC/WHO对照 |
正常人样本数据检测 |
血清,EDTA血浆,肝素血浆,柠檬酸盐血浆,尿液 |
血清,EDTA血浆,肝素血浆 |
LPS刺激样本检测 |
全血样本,PBMC(外周血单个核细胞),THP-1(人类单核巨噬细胞) |
无 |
美国Meso Scale Discovery(MSD):成立于1995年,在2009年全球首次检测到人携带甲型H1N1病毒,在2013年被评为“全球前五的免疫分析品牌”。其研发的基于微孔板的电化学发光检测技术(简称:微孔板ECL
)是全面升级/替代ELISA, Western
Blot,多蛋白因子检测的第三代免疫分析技术。已经广泛被医药研发中心、药物安全性评价中心、GLP实验室、合同外包企业(CRO)、诊断、生物技术企业应用于药物筛选,动物模型,药物代谢,血药浓度,免疫原性,中和实验,Biomarker筛选,抗体亲和力,疫苗评估,宿主细胞残留,诊断研究。
美国Meso Scale Discovery(MSD)部分应用方向:
1、细胞因子研究:实现多因子研究,常规灵敏度达0.05pg/ml。符合GLP要求的多因子检测。
2、信号通路研究:可实现同时检测Phospho/Total磷酸化蛋白的研究,仅需4.5小时。
3、神经退行性疾病研究:使用了脑脊液CSF等复杂基质样本检测,无基质效应。
4、药物安全性评估:符合FDA标准的高敏多指标检测。
5、免疫原性评估:可兼容高达50ug/ml高浓度血药干扰,达到<100ng/ml的ADA检测灵敏度,符合FDA要求。
6、抗体亚型分型:快速鉴定样本中不同亚型,可达0.1ng/ml的灵敏度水平
7、抗体表位分析:一次鉴定多达10种不同表位。
8、多价疫苗效价评估:缩短至1.5小时的评估流程。
9、抗体亲和力测试:基于SET方法学的亲和力测定,可分析高达10-15的亲和力样本。
10、中和抗体测定:基于细胞水平,更符合实际生物体要求。
11、细胞水平结合测试:Cell Base Binding测试,多达6log线性范围,能够鉴定细胞表面受体与对应补体结合水平及亲和力
12、生物工艺残留测定:一次检测,可鉴别多种宿主细胞以及纯化工艺中的多种蛋白残留测定,亚纳克基本灵敏度,确保鉴定有效性。