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人脐动脉平滑肌细胞培养可以:(1)获得人脐动脉平滑肌细胞;(2)作为重大动脉疾病的研究底物;(3)研究血管模型;(4)对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。
消化法
贴块法
脐带
胶原酶消化液 胰蛋白酶 胶原酶 弹性蛋白酶 DMEM
眼科剪 滴管 离心机 培养皿 CO2培养箱
一、实验步骤 1. 冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗,用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织,转入青霉素小瓶中,加入少量无菌D-Hanks’液,用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片。
2. 用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴,再用无菌D-Hanks’液反复清洗8~10 次。
3. 加入 10 倍体积无菌胶原酶消化液(1 mg/mL),室温消化30 min,1000 rpm离心 5 min,弃上清,加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min,再次离心5 min,弃上清。
4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min,再次离心5 min,弃上清。
5. 加胶原酶(1 mg/mL)弹性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min,再离心5 min,弃消化液。
6. 加混合消化液 37℃消化 20 min,再次离心 5 min,细胞加含 10% FBS的DMEM培养基重悬,转入培养皿 37℃、5% CO2培养箱中培养即可。