* 仅使用新鲜骨髓。避免冷冻和解冻骨髓细胞，并在无菌条件下进行。
1. 用针头从髂骨上嵴或胸骨采集骨髓。
2. 用缓冲液以7：1的比例稀释抽吸的人骨髓，例：用5mL缓冲液稀释30mL的骨髓，最终体积为35mL。
3. 100µm过滤器过滤，去除骨碎片和细胞团。（▲注：使用前，先用缓冲液的润洗滤器。）
4. 将35ml稀释的细胞悬浮液与15ml的Ficoll-Paque混合于50ml圆锥形瓶中。
5. 445g，20°C，离心35min。
6．除去上清 ，吸取BM MNCs ,至新的50ml圆锥形瓶中。
7．加入40ml缓冲液洗涤细胞，在20°C 300g离心10min，弃上清液。
8. 为去除血小板，将细胞颗粒重新悬浮在50mL缓冲液中， 20°C ，200×g离心10-15min，弃上清液。
9. 将细胞颗粒重新悬浮在适量的缓冲液中，以供下游应用。
▲注：骨髓单个核细胞可以在含有0.5%牛血清白蛋白或自体血清的PBS中保存过夜。细胞在冰箱中保存的时间不要超过一天。在进行磁性标记之前至少清洗一次，并将细胞重新悬浮在适当的缓冲液中。
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