PURELAB flex（配生物过滤器）可以清除内毒素、RNase、DNase和...

PURELAB flex（配生物过滤器）可以清除内毒素、RNase、DNase和细菌

内毒素 内毒素是革兰氏阴性活菌外膜脱落的脂多糖。 细菌细胞死亡时释放出内毒素。 内毒素与细胞相互作用，造成多种不利影响（参考文献1Dawson和参考文献2　Nagano）。 内毒素对试管内受精（参考文献3　Dumoulin）和细胞培养（参考文献4　Stacey）等其他应用影响很大。 实验（细胞分裂、电泳及其他生化工艺等）可靠性的提高得益于内毒素的清除。 在pH >2 时，内毒素带负电，使用ELGA LabWater生物过滤器等带正电过滤器可将其有效清除。带电的过滤器对水流构成的障碍最小，最适合作为纯水系统的终端过滤器。

内毒素挑战实验
对生物过滤器的挑战实验是向带正电的过滤器进水中不断注入高含量的内毒素，然后采用鲎变形细胞溶解物试验（动态浊度法）测量产水中的内毒素浓度。

大多数的内毒素挑战实验均要使用净化的LPS。 ELGA LabWater的科研团队从纯水中已有的细菌中生产出自己的LPS。 这是为了模仿逼真的挑战实验环境。

首先从纯水中分离出细菌。然后将细菌接种到蛋白胨水中，在27℃的温度下培养。对样品反复进行加热处理，用0.45μm 过滤膜进行过滤，由此得到浓缩的内毒素。

每个挑战实验持续5分钟，得出以下总挑战实验结果：即使挑战实验超过了90 EU/ml，总挑战实验接近800000 EU，在生物过滤器后的产水中也未能检测出内毒素（<0.001EU/ml）。

实际上，过滤器的进水中内毒素的含量极低（<0.1EU/ml）。为了更逼真地模仿实际情况，以内毒素含量为1EU/ml（标称）的纯水做进水，对生物过滤器做长时间的测试：在流过800升后仍未能检出内毒素（<0.001EU/ml）。

DNase与RNase
很多人担心纯水中可能存在RNase与DNase等其他生物活性杂质。

纯水中存在此类杂质可能会给实验带来严重的干扰。但是，离子交换树脂和紫外灯可将其去除。定期杀菌和维护的设计独特的纯水系统，其产水中不含此类杂质。

本检测使用增强版Ambion® Alert测试程序，该程序基于检测可裂解荧光标记RNase或DNase基质。 测试结果表明RNase的检测含量较低，达到 <0.002 ng/ml，DNase的含量为<20 pg/ml。即使此类杂质很高，PURElAB flex（配生物过滤器）也能有效地去除了RNase和DNase（RNase<0.002 ng/ml，DNase<0.02 ng/ml）。PURELAB flex（配生物过滤器）生产的纯水可以替换限制使用二乙基焦碳酸（DePc）做水处理的情况（按照ELGA LabWater的建议，其对杀菌与维护有限制）。

TOC与电阻率冲洗
在从设备的产水中清除任何内毒素的同时，该生物过滤器必须不对水造成污染。 新过滤器首次使用时，快速电阻率与TOC冲洗十分方便；同时，也清楚表明其对产水的污染会始终很低。 这一点很重要，因为通过过滤器的产水纯度是无法监测的。生物过滤器的TOC与电阻率快速冲洗如下所示：

新的生物过滤器的TOC与电阻率冲洗

细菌挑战实验
在PURELAB flex内，纯水循环流过紫外灯，接受254和185nm的强紫外线照射，将细菌含量控制在极低水平。采用具有0.2μm细菌过滤能力的生物过滤器将剩余的微量细菌清除掉。在使用内含1 x 107 CFU/ml的料液进行细菌挑战实验时，生物过滤器完全清除了细菌：等效于对数减少系数>8。

下图显示了在6个月中，纯水系统（配有生物过滤器）产水总活菌数（TVC）的典型数值。

总结
PURELAB flex（配生物过滤器）可极其有效地生产无生物活性杂质的超纯水，因此，适用于使用无内毒素超纯水、无细菌水及无核酸酶超纯水等的应用。

参考文献
文献1： Dawson Me (1998) lAl update. Associates of cape cod; Vol. 16: 1-4
文献2： Ref 2: nagano M, Takahashi y, Katagiri S (1999) J. Reprod. Dev.; 45: 239-242
文献3： Dumoulin Jc, Menheere PP, evers Jl (1991) human Reproduction; 6: 730-734
文献4： Stacey g (2007) in Medicines from Animal cell culture. Stacey g, Davis J. John Whiley &Sons, chichester, chapter 31

PURELAB flex（配ELGA生物过滤器）性能规格   • 内毒素 <0.001 EU/ml   • RNase <0.002 ng/ml   • DNase <20 pg/ml (<0.02 pg/μl)   • 细菌 <10 CFU/100ml（<0.1 CFU/ml） PURELAB flex以纯水或自来水做进水连续生产超纯水。 安装ELGA LabWater生物过滤器后，即可生产去除了生物活性杂质的超纯水。 去除了生物活性杂质的超纯水适于细胞培养等生物化学和分子生物学 应用。