前言
X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一种非脂质体、多组分转染试剂,已被证明可有效转染多种细胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清条件下均可进行转染,且细胞毒性低,转染后无需更换培养基。
降低转染试剂本身的脱靶效应是非常重要的:
■ 在长时间内保证转染目标基因的高表达率
■ 减少死细胞数目及其释放的蛋白酶,能高表达未被消化的目的重组蛋白。
■ 获得同转染目标基因生物相关的结果
本研究中,在Hela细胞上进行了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HPTransfection Reagent的细胞毒性和转染效率检测,并与其他试剂进行了比较。
步骤
■ 细胞毒性使用xCELLigence RTCA MP仪器进行检测,通过测定电阻抗,可长时间、无标记、动态监控细胞生理活动,包括细胞黏附、伸展、增殖、死亡以及其他形态变化。新推出的配套耗材E-plate VIEW 96每个孔下部有0.5mm透明的窗口,可完成可视化的精微检查。
■ 罗氏自动化图像捕获和分析系统Cellavista,其为结合可见光和荧光成像优点的全自动、高通量精微细胞图像分析工作站,在实验中观测细胞形态学变化和检测转染效率。
■ 细胞代谢活动可由WST-1细胞增殖试剂盒分析检测,定量活性细胞的代谢活力。
结果
细胞毒性
■ xCELLigence RTCA MP仪器的连续监测显示,使用X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent在Hela细胞上转染GFP表达质粒,与未处理对照组的细胞指数(Cell Index, CI)值是相似的(图1)。而其他试剂在转染5个小时后,细胞指数值有明显的下降,表明存在细胞毒性。
图1: 使用X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent及其争转染试剂在Hela细胞上转染GFP表达质粒后,xCELLigence 检测的细胞指数变化曲线图。
图2:Hela细胞转染后的形态。可见光图像由Cellavist仪器获得(10倍放大)
■ Cellavist可视化检测细胞形态,转染24h后获得可见光成像图。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP转染的Hela细胞呈现健康状态,而其他试剂组则存在大量死亡细胞(图2)。