实验方法原理
LDH,S-乳酸:NAD+氧化还原物;L-乳酸脱氢酶。
L-乳酸 + NAD + ⇌ 丙酮酸 + NADPH + H +
由于借助 ADH,反应可以从两个方向检测,但是对于这个平衡,即使考虑到 NADH 在反应起始时有高吸收值,丙酮酸的还原反应也是首选的。
实验材料 LDH 稀释溶液
试剂、试剂盒 磷酸钾NADH丙酮酸
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml LDH 稀释溶液
25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH的吸收系数ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
其他
试剂:
0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0
0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于10 ml H2O 中)
0.1mol/l 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110;110 mg溶于10 ml H2O 中)。
LDH 原料溶液(从猪心脏提取,例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0 稀