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L-乳酸脱氢酶测定

2020.8.17
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

实验方法原理


LDH,S-乳酸:NAD+氧化还原物;L-乳酸脱氢酶。


L-乳酸 + NAD + ⇌ 丙酮酸 + NADPH + H +


由于借助 ADH,反应可以从两个方向检测,但是对于这个平衡,即使考虑到 NADH 在反应起始时有高吸收值,丙酮酸的还原反应也是首选的。


实验材料 LDH 稀释溶液

试剂、试剂盒 磷酸钾NADH丙酮酸

仪器、耗材 分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.98 ml 实验混合物



0.02 ml LDH 稀释溶液


25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH的吸收系数ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


注意事项

其他

试剂:


0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0


0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于10 ml H2O 中)


0.1mol/l 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110;110 mg溶于10 ml H2O 中)。


LDH 原料溶液(从猪心脏提取,例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH 7.0 稀


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