实验材料 肝素
试剂、试剂盒 199培养液小牛血清链霉素青霉素PHA
仪器、耗材 注射器针头试管吸管离心机
实验步骤 | 1. 采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20单位)充分混匀。37℃静置1~2小时。红细胞沉淀后,吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000 rpm 离心10分钟。弃上清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1×107/毫升细胞悬液。 2. 取细胞悬液0.6毫升(6×106细胞)加入含有2.4毫升199培养液的培养瓶中。
3. 按每毫升营养液加30 ug PHA加入PHA。
4. 37℃孵育68~72小时。培养过程中,每天翻动培养瓶1~2次。
5. 培养后。振荡培养瓶。将细胞重新悬起,然后移入试管中。
6. 1000 rpm 离心5分钟。
7. 尽量弃去上清液,将沉淀物混匀,取一滴放在载玻片上,推成血膜(头、体、尾分明)干燥,用瑞特氏染液染色)镜检。
8. 计算淋巴细胞的转化率:油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列(目的是减少推片中细胞分布不均的误差)。
9. 每张玻片记数200~400个细胞,计算转化率其中头部50~100,体部50~100,尾部100~200细胞。 一般认为转化率的正常值为60~70% |
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其他 | 淋巴细胞的转化标准
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