（2）来自永生化淋巴细胞株
1.增殖细胞，直至全培基到50mL。.
2.收获细胞前的18〜24h，更换新鲜培养液。
3.收获时，将20mL生长良好的细胞移到50mL离心管中。
4.加200ΜL浓度为10μ×g/mL秋水酰胺，轻轻混匀。
5.37℃条件下孵育50〜60min。
6.180g离心5min。箱或水浴箱)。
5.预热Multiprobe®装置，探针面朝上（即突出表面朝上，标记表面朝下），不要接触突出方形块的表面。
6.准备一个染色缸装2×SSC，三个染色缸分别装70%、85%和100%的乙醇系列。
7.用2×SSC洗点好样的片子2min，然后依次在70%、85%和100%的乙醇中各脱水2min。
8.片子空气干燥后，有样品一面朝上的放在37℃加热板上。
9.同时，用10斗移液器取2,预热杂交液点到Multiprobe®装置上的突出方形块上（放置在37℃加热块上）。
10.小心翻转片子（点样品面朝下），使之与Multiprobe®装置上相应的方块接触，组装到Multiprobe®装置上;也就是方块1在Multiprobe®装置的最右上角。
11.小心地提起组装好的装置，翻转使片子在Multiprobe®装置的下面。
12.放在37℃加热板上10min。
13.将组装好的装置保持水平小心地转移到75℃加热板上。
14.变性1〜3min，变性时间取决于固定的染色体悬液时间长短。
15.立即转移组装好的装置到预热的ChromoprobeMultiprobe®杂交室（或者避光塑料玻片盒）中，更换盖子，然后在去盖的水浴锅中过夜。
二、
（4）杂交后洗脱和封片
1.将洗脱液I倒入干净的染色缸中，水浴中预温至72℃后，调整pH至7.0。
2.将洗脱液II倒入干净的染色缸中，室温（20〜25℃)放置。
3.从杂交室中取出组装好的Multiprobe®装置。
4.小心卸下Multiprobe®装置，立即将片子放在洗脱液I中2min，用镊子
夹住片子，轻轻的上下振荡。
5.转移到洗脱液II中30s。
6.夹住片子的长边，在纸上沥去过量液体10〜20s，但注意玻片表面不能干。
7.加20μL含DAPI的抗淬灭剂溶液到盖玻片（24mm×60mm，试剂盒中提供）的两端，轻轻地将片子上的杂交区域压到盖玻片上。
8.检查复染的区域，用钝头镊子轻轻按压排掉气泡。
9.将吸水纸盖在标本上方，轻轻按压以除去过量的液体。
10.将指甲油涂在盖玻片周围来封片。
11.观察前至少在黑盒或玻片夹中放置至少10min以备阅片。
（5）荧光显微镜下分析杂交后的片子
1.将标本放在显微镜载物台上。
2.使用10倍的物镜和DAPI滤光片观察第一方块，观察单个细胞的中期染色体。
3.加镜油到方形块，转换成100倍的油镜。
4.转换到三通滤光片（DAPI/FITC/德克萨斯红）观察中期染色体。
5.计数绿色短臂信号和长臂红色端粒信号，并记录染色体的位置。第一方块的正常实验结果是1号染色体上有两个绿色信号在短臂端粒区，两个红色信号在长臂端粒区。
6.分别用FITC滤光片或德克萨斯红滤光片确认实验结果。
7.重复步骤2〜6,直到该孔中不同的5个中期分裂相均得到明确的结果。
8.每个孔的检测都重复步骤2〜7。
9.记录分析结果，任何不正常的结果或者某些探针杂交结果不满意时，应该用这些探针重做杂交实验。
10.确认异常时采用患者的新鲜样本，可能的话同时分析父母样本，这样将有助于判定异常是否是真异常（如果为真异常的话，确定是原发的还是家族遗传的），还是良性多态变异的结果。
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