2、加3% H2O2，细胞片20ul/孔，培养板100ul/孔，使充分覆盖住细胞。
3、室温10分钟后，甩掉 H2O2，用PBS轻轻淋洗2分钟。用滤纸吸干细胞周围水份，96孔在滤水纸上扣干，但注意保持细胞湿润。
三、封闭
细胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），细胞板用2-5%BSA（PBS配制）100ul/孔，置37℃孵育30分钟后甩掉封闭液，不洗。
四、免疫化学染色
1、分别加一抗和所有对照一抗，细胞法10-20ul/孔，细胞板50ul/孔，使充分覆盖细胞。37℃1小时或4℃冰箱过夜；
2、弃去一抗，如为细胞涂片用PBST轻轻简单淋洗1次后，浸于100
mL含PBST洗杯，漂洗（最好在慢速摇床上）3-5分钟，转入第二杯PBS（100
ml），如上法漂洗3-5分钟。擦干细胞片周围水分，96孔板则倒掉一抗后，每孔加满PBST在摇床上摇洗3-5分钟后倒掉，在滤纸上扣干，但保持细胞湿润，反复3-4次；
3、加SP试剂（SP法，即放大法）
（1）加已优选好的浓度的Biotin标记二抗，细胞片10ul/孔，细胞板50ul/孔，使充分复盖细胞。37℃孵育30分钟；
（2）按免疫化学染色“2”所述方法洗涤和擦干；
（3）加已优选好浓度的SP试剂，用量同“（1）”，37℃孵育30分钟后按免疫化学染色“2”法洗涤及擦干；
4、间接法加二抗（不放大法）
方法同SP法，但不用Biotin标记二抗，而改用HRP直接标记二抗。并省略（3）步骤；
5、加底物显色
（1）加足量的AEC显色液，充分覆盖细胞层，细胞玻片20ul/孔，细胞培养板50ul/孔，置于37℃恒温箱孵育5-10分钟，一般在显微镜下根据结果颜色的呈现情况掌握染色时间，以得到满意的结果（阳性对照显色程度为“+++” ），用自来水即可终止反应；
（2）复染：苏木素染液（使用时间最好不超过两个月）加苏木素复染液1-2滴，1分钟左右，在自来水龙头下轻轻冲洗掉苏木素，再浸于PBS中约30 秒钟返蓝，最后在蒸馏水中漂洗。
6、封片
洗后细胞片擦去周围水分，滴加1滴甘油—明胶封片液，加盖玻片，除去气泡，用指甲油或树胶封固玻片。
五、结果判断
阳性——诱导细胞有10%-30%显红色，强度不一，未诱导阳性细胞（1-30%）；阴性——诱导和未诱导BCBL-1细胞完全不显色（排除边缘效应）
六、注意事项
1、一抗、二抗的稀释采用1% BSA/PBS，Sterptavidin-HRP的稀释采用PBS；
2、整个反应过程在湿盒中进行（细胞片）；
3、洗涤时应使用染色缸（细胞片）；
4、对照系统，必须要做的对照系统：阳性对照：标准一抗，阳性血清，阳性上清；阴性对照：（1）阴性一抗对照：小鼠免疫前血清、测上清时用原克隆上清液；（2）阴性抗原细胞对照：未感染病毒的细胞，每个待测及对照均须做阴性细胞对照：空白对照：不加一抗，用1%BSA替代；无关对照：与本项目无的第一抗体。
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