由于在实际应用时补体有一部分损失，故需酌量增加一些，通常取其次高的一管补体量称为1个使用单位。在下例中：
1 个确定单位 =0.1ml 1:30 稀释的补体。
1 个使用单位 =0.12ml1:30 稀释的补体。
4 ）补体的稀释 若使每 0.2ml 补体含 2 个使用单位，可照下式计算： 30 :（2 × 0.12 ） = x : 0.2
0.2 × 30
=250.24
即将补体稀释25倍，取0.2ml即可。
|
试管号 |
补体 （ 1 ： 30 ） |
生理盐水 |
37 ℃水浴 45分钟 |
溶血素 (2 单位 ) |
2% 羊红 细胞悬液 |
37 ℃水浴 15 ~ 30 分钟 |
结 果 |
|
1 |
0.06 |
0.54 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
2 |
0.08 |
0.52 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
3 |
0.10 |
0.50 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
4 |
0.12 |
0.48 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
5 |
0.14 |
0.46 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
6 |
0.16 |
0.42 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
7 |
0.18 |
0.40 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
||
|
8 |
— |
0.60 |
0.2 |
0.2 |
不溶血 |
三）正式实验
正式实验可以做定量的，也可以做定性的。本实验用伤寒杆菌的提取液为抗原，与其免疫血清做定性实验。
1 材料
1）补体 1:25 稀释
2）抗体 1:5 稀释的伤寒血清
3）抗原 1:50 稀释的伤寒抗原,1:50 稀释的痢疾抗原
4）指示系统2单位溶血素,2% 绵羊红细胞。
5 ）其他 同预备实验
2 方法
按下表顺序操作:
|
试管号 |
伤寒血清 |
伤寒抗原 |
痢疾抗原 |
补体 |
生理盐水 |
37 ℃ 水浴 45 分钟 |
溶血 系统 |
混匀后 3 ℃水浴 30分钟 |
结果 |
|
1 |
0.2 |
0.2 |
— |
0.2 |
— |
实验管 |
|||
|
2 |
0.2 |
— |
0.2 |
0.2 |
— |
特异性对照 |
|||
|
3 |
0.2 |
— |
— |
0.2 |
0.2 |
血清对照 |
|||
|
4 |
— |
0.2 |
— |
0.2 |
0.2 |
抗原对照 |
|||
|
5 |
— |
— |
— |
0.2 |
0.4 |
补体对照 |
|||
|
6 |
— |
— |
— |
— |
0.6 |
溶血素对照 |
3 结果
观察各管溶血情况，记录并分析其意义。
4 注意事项
1 ）以细菌做抗原时，应使用细菌的提取液而不是悬液，通过滴定找出最合适的稀释度
2 ）所用试管，微量板，吸管等器材必须清洁无脂，各试剂无菌，以防止抗补体现象。
3 ）除了 免疫球蛋白外，本实验中的其他成分均需要滴定。
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