Tips
根据研究目的的不同，有时需要抗体既可识别修饰后的蛋白，又可识别无修饰的蛋白，即pan抗体。针对这类抗体，筛选时需要能识别两种多肽。
PART03 应用于试剂盒配对用抗体
试剂盒配对用抗体通过识别蛋白不同表位来检测样品中目的蛋白的含量。因此设计此类免疫原应先调研该蛋白的整体结构、整个蛋白的大小以及是否含有剪切片段；进而根据调研的信息设计蛋白片段。或制备全长蛋白，或制备蛋白片段。抗体筛选根据阳性抗体进行表位预测，针对不同表位的抗体进行配对检测，最终获取需要的抗体对用于试剂盒后期的研发。
图4：针对M1102项目蛋白免疫并获取的单克隆抗体
该实验用6B9作为竞争抗体。实验结果显示：克隆A5A7与A4A8的结合位点与6B9不同；克隆A3F5的结合位点与6B9类似；克隆A4A7的结合位点与6B9有部分相似。因此我们在进行配对实验的时候，可以优先挑选结合位点不同的抗体进行配对，如6B9-A4A8, A4A7-A4A8等。
PART04 应用于抗体药物的研发
抗体药物的研发指针对不同的药物靶标，进行大量的抗体药物前提的研发。
用于药物研发的抗体，免疫原设计要求更为严格，目前免疫阶段采用真核表达的蛋白。抗体药物靶标主要分为两类，分泌型靶标（VEGF, IL-6, IL-17等）和跨膜蛋白（PD-1， BCMA, EGFR等）。
分泌型靶标，一般直接制备真核表达的蛋白用于免疫。蛋白制备后对所表达的蛋白进行功能性实验的检测、细胞的增殖作用以及与相应配体的结合实验等，以确保所制备的免疫原是有活性的蛋白。
跨膜蛋白，所制备蛋白的策略会有不同，如下图所示。
图5：蛋白的跨膜结构
图6：蛋白胞外区的不同结合结构域示意图
上图蛋白为I型膜蛋白，胞外区为蛋白的结合区，胞内为蛋白的活性区域。在设计免疫原的时候，有两个策略。一是设计胞外的结合区，制备蛋白；二是用过表达该蛋白的细胞作为免疫原。设计免疫原后，利用相应的需要设计检测的蛋白进行抗体的筛选。有时蛋白的胞外区会有不同的结构域，如IgC结构域，α亚基，β亚基等（图4），针对此类蛋白，根据文献，可以找出最重要的结合结构域制备蛋白。最佳策略是制备胞外区的片段以及含特殊结构的蛋白用于免疫，效果更佳。
Tips
利用过表达细胞进行免疫，可以使蛋白以天然状态展示在细胞表面，并结合蛋白筛选和细胞筛选，这样得到的抗体，其结合活性更佳。
PART05 其他特殊的抗体
对于不同研究目的需制备不同的抗体。如针对特殊结合位点的抗体研发。
图7：某蛋白与小分子的结合示意图。
小分子与该蛋白的结合位点为一边是折叠区尾部结构，一边是线性区域，而且该小分子与蛋白的其他部分无接触。因此，设计免疫原主要以线性表位为主，同时根据折叠区和线性表位的距离，设计T细胞表位的多肽。
同时，有些蛋白有原始形态和剪切体，针对这类抗体设计免疫原，需根据最终需要检测的目的片段进行设计，可以设计同时识别剪切体和全长，也可设计只识别全长，这类抗体有时可以用于检测血清的游离分子的残存。
总结
综上所述，制备免疫原的方法较多，但根据抗体的最终用途，免疫原的设计策略各有不同。如何能做到事半功倍，前期需要对靶标有充分的认识，选择合理的片段进行制备，才能得到我们所需的抗体。
以上就是华安生物进行免疫原设计的一些浅显经验，希望能给正在研究的小伙伴们带来帮助，有需要的童鞋记得收藏哦~
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