HeLa细胞中α-微管蛋白的免疫荧光染色:将固定和透化的HeLa细胞中的α-tubulin与兔抗tubulin一抗一起孵育,然后与生物素化的山羊抗兔IgG(H&L)(Cat# 16794)进行孵育,然后加入iFluor™647-链霉亲和素偶联物(Cat# 16966),使用DAPI(Cat# 17507)对细胞核进行复染。
①. 用于成像和流式细胞术的iFluor-链霉亲和素缀合物:
产品名称 | Ex / Em(nm) | 滤光片组 | 消光系数 | FQY² | 规格 | 货号 |
iFluor™350链霉亲和素 | 344/448 | DAPI | 20,000 | 0.95 | 1 mg | 16980 |
iFluor™405链霉亲和素 | 402/425 | DAPI | 37,000 | 0.91 | 1 mg | 16982 |
iFluor™488链霉亲和素 | 491/516 | FITC | 75,000 | 0.9 | 1 mg | 16985 |
iFluor™514链霉亲和素 | 527/554 | TRITC | 80,000 | 0.83 | 1 mg | 16986 |
iFluor™532链霉亲和素 | 543/563 | TRITC | 90,000 | 0.68 | 1 mg | 16987 |
iFluor™546链霉亲和素 | 541/557 | TRITC | 100,000 | 0.67 | 200 mg | 16958 |
iFluor™555链霉亲和素 | 556/569 | TRITC | 100,000 | 0.64 | 1 mg | 16989 |
iFluor™568链霉亲和素 | 568/587 | TRITC | 100,000 | 0.57 | 200 mg | 16960 |
iFluor™594链霉亲和素 | 587/603 | Texas Red | 180,000 | 0.53 | 1 mg | 16992 |
iFluor™633链霉亲和素 | 638/652 | Texas Red | 250,000 | 0.29 | 1 mg | 16995 |
②. mFluor™链霉亲和素偶联物用于流式细胞术:
用mFluor™染料标记的链霉亲和素偶联物具有最小的自发淬灭,可为流式细胞仪产生强烈的荧光和稳定偶联物。mFluor™链霉亲和素偶联物设计用于通过流式细胞仪中常用的主要激光线之一(例如405 nm,488 nm,532 nm,561 nm或633 nm激发光)进行最佳激发。
用(红色)或不用(绿色)1ug / ml生物素标记的抗人HLA-ABC的HL-60细胞的流式细胞分析,然后添加mFluor™Blue 570-链霉亲和素偶联物(Cat# 16935)。
用于流式细胞术的mFluor™链霉亲和素缀合物:
链霉亲和素缀合物 | Ex(nm) | Em(nm) | 滤光片组(nm) | 货号 |
mFluor™紫色450链霉亲和素 | 405 | 444 | 450/40 | 16930 |
mFluor™紫色510链霉亲和素 | 408 | 503 | 525/50 | 16931 |
mFluor™紫540链霉亲和素 | 393 | 536 | 525/50 | 16932 |
mFluor™蓝色570链霉亲和素 | 505 | 564 | 575/26 | 16935 |
mFluor™Green 620链霉亲和素 | 522 | 621 | 610/20 | 16938 |
mFluor™黄色630链霉亲和素 | 609 | 626 | 610/20 | 16942 |
mFluor™Red 700链霉亲和素 | 685 | 704 | 730/45 | 16946 |
mFluor™红色780链霉亲和素 | 629 | 780 | 780/60 | 16948 |
③. 链霉亲和素APC,PE,PerCP组成串联染料偶联物用于流式细胞术:
链霉亲和素PE,APC和PerCP偶联物通常用于需要高灵敏度但不需要光稳定性的应用中,主要是流式细胞,FACS,免疫表型和微阵列。藻胆蛋白异常明亮的荧光是由于它们异常高的消光系数和量子产率。
串联染料偶联物是将供体藻胆蛋白(例如APC或PE)标记到受体iFluor™染料上,后者在较长波长下发出荧光。使用荧光共振能量转移(FRET),供体藻胆蛋白吸收的光导致受体的荧光发射。在流式细胞仪中,串联染料非常适合用于细胞的多色参数分析,这是因为它们利用的是单个激发光源并且其斯托克斯位移(Stokes shifts)非常大。
用于流式细胞的链霉亲和素APC,PE,PerCP和串联染料偶联物:
链霉亲和素缀合物 | Ex(nm) | Em(nm) | 过滤器组 | 货号 |
RPE链霉亲和素 | 564 | 574 | 575/26 | 16900 |
APC链霉亲和素 | 651 | 660 | 660/20 | 16902 |
PerCP链霉亲和素 | 477 | 678 | 695/40 | 16905 |
RPE-iFluor™647链霉亲和素 | 568 | 666 | 670/14 | 16906 |
RPE-iFluor™750链霉亲和素 | 566 | 778 | 780/60 | 16907 |
APC-iFluor™750链霉亲和素 | 651 | 791 | 780/60 | 16908 |
RPE-Cy7链霉亲和素 | 566 | 778 | 780/60 | 16916 |
④. 链霉亲和素-Xtra™缀合物:
链霉亲和素-Xtra™iFluor™偶联物可用于细胞成像,流式细胞(FC)和蛋白质印迹(WB)等应用中生物素化抗体的检测,从而产生最亮的荧光。与传统的AlexaFluor®链霉亲和素缀合物相比,Xtra™iFluor™链霉亲和素缀合物可对低丰度目标蛋白进行成像,具有更高的灵敏度和细节。
链霉亲和素-Xtra™缀合物优点:
明亮且稳定的荧光,无明显的自发淬灭
较高的信噪比:与AlexaFluor®相比,信号改善了3-5倍
在较宽的摩尔范围荧光内不受pH影响
用链霉亲和素-Xtra™IF488和链霉亲和素-AlexaFluor®488染色的HeLa细胞的比较
链霉亲和素-Xtra™缀合物:
链霉亲和素缀合物 | Ex(nm) | Em(nm) | 滤光片组 | 货号 |
链霉亲和素-Xtra™iFluor™488 | 491 | 516 | FITC | 46001 |
链霉亲和素-Xtra™iFluor™555 | 556 | 569 | TRITC | 46003 |
链霉亲和素-Xtra™iFluor™594 | 587 | 603 | 德州红 | 46005 |
链霉亲和素-Xtra™iFluor™647 | 654 | 669 | Cy5 | 46007 |