1. 原理:GPI催化果糖-6-磷酸(F6P)转变为葡萄糖6磷酸,后者在葡萄糖6-磷酸脱氢酶催化下,转变为6磷酸葡萄糖酸。在此反应中,NADP+转变成还原型NADPH,在紫外光下,NADP+不显荧光,而NADPH则显荧光。
2. 试剂:
2.1 PH8.0Ttris-HCL.(含EDTA 5mM) 1M 100ul
2.2 Mgcl2 0.1M 100ul
2.3 D6PD (3ul) 10v/ml 100ul
2.4 NADP (0.6mg) 2mM 200ul
2.5 DW 400ul
2.6 F6P (1.29mg) 20mM 100ul
3. 操作:
取抗凝血1-2毫升用生理盐水洗涤;取压积红细胞25微升加入溶血液475微 升(1:20)中制成溶血液;吸取5微升溶血液加入100微升反应液中;37度温育30分钟后滴1滴在干滤纸上;自然干燥。在紫外线光下观察滤纸斑点的荧光。
附:溶血液配方:β-巯基乙醇0.05ml+中性EDTA10%PH7.010ml+水至1000ml。
4. 结果:GPI活性正常:30分钟内出现荧光。GPI活性缺乏:超过30分钟不出现荧光。
5. 正常参考值:GPI活性正常
6. 注意事项:每次试验需作正常对照;贫血病人取血量要相应增加。
7. 临床意义:阳性为GPI缺乏。