血浆游离血红蛋白测定

1． 原理：联苯胺在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白作用可以生成氧化联苯胺并产生由绿至兰最后形成紫红色的一系列颜色反应。根据所呈颜色反应测定血浆中血红蛋白的浓度。

2． 试剂：

2．1联苯胺醋酸液：取联苯胺1克放于是100ML容量瓶中，加D.W25ML加温促溶解。待微冷却后，滴加冰醋酸至刻度；混匀，放入棕色瓶中，冰箱保存备用。

2．2 0.3％双氧水：取30％双氧水0.1毫升加9.9毫升D.W(必需新鲜配制)。

2．3标准血红蛋白液的制备(见HP)：用已知准确浓度的标准血红蛋白液稀释成,0.2克/L,0.1克/L,0.05克/L标准血红蛋白液。

3．操作：
  

加盖放入37℃20分钟后再加入10%醋酸5ML;混匀;用B管调0;波长500nm

4．计算：

F-Hb(mg%)={(200+100+50)/3／(S1+S2+S3)}×R={175／(S1+S2+S3)}×R

5． 正常参考值：F－Hb：0~50mg/L。

6．注意事项：

6．1 一切溶器避免血红蛋白污染。

6．2 取血器皿要干燥；采血要顺利，切忌人为溶血。（如有气泡；注入过快等）。

6．3 注意避免硫离子或醚、硅混入，否则会产生混浊。

6．4 双氧水要新配，浓度要准确，联苯胺醋酸液的含水量＞15％＜30％。

7．临床意义：血浆游离血红蛋白增加的血管内溶血的指征。Hb超过血流中的结合珠蛋白的结合能力时，血浆游离血红蛋白便增加。如蚕豆黄、PHN、阵发性寒冷性Hb尿、冷凝集综合征及其它微血管病性溶血性贫血。血管外溶血则可正常。