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洗脱液的流速过快时目的物的过早解吸,会引起区带扩散;过慢时,目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。
洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不致于太拥挤。梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来。梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。