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一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果最佳;孵育时间与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,4度过夜(从冰箱拿出后37度复温45min)。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h,浓度一般有工作液,若是浓缩液还要摸索浓度。