首先,我们需要判断
这到底是一个峰,还是两个峰?
A图主峰前面有一个肩峰
这到底是峰形不好
还是另外一个化合物没分开呢?
降低该成分在样品中的浓度
B图是降低该成分浓度后
进样后得到的色谱图
如果这是一个峰
那肩峰也应该响应变小
但是这个例子里
肩峰没有变小
这应该是另外一个化合物
这时候,我们就要考虑如何改变方法
将这两个东西分开
如果所有峰的峰形都不好
一般来说
一个样品都会出多个峰
峰形不好,绝大多数时候
在每个峰上面都会出现
比如像下面这样:
A图是所有峰都拖尾.
B图是所有峰都有肩峰,
也可以说峰分叉
这种情况一般都是色谱柱头塌陷
或者柱头的筛板被堵导致的
A图是正常的柱头
B图是筛板被堵的柱头
正常情况下
所有样品分子都是均匀通过色谱柱
形成一个对称的峰形
堵塞的情况下
有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰
导致时间拖后,形成拖尾
对于色谱柱塌陷的情况
用同样的方法大家也不难理解
只不过这时候
是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些
原因及解决办法
流动相不合适:
流动相的选择或比例可能不适宜于待分离的物质。例如,在反相色谱中,减少有机相的比例通常会导致保留时间增长,从而可能改善分离效果。
可以尝试调整流速来优化分离效果。例如,将流速从1 ml/min调至0.7 ml/min,可能会带来更好的分离结果。
化合物部分氧化:
样品中的化合物可能在储存或处理过程中部分氧化,导致色谱图中出现多个峰。这种情况下,可以尝试用流动相按1:1稀释后再次进样,以检查是否为化合物氧化所致。
色谱柱问题:
色谱柱可能由于使用时间过长或不当操作而出现问题。可以通过使用标准品进行验证,以确认柱子的性能是否达标。
柱头可能被污染物堵塞,导致流动相流动不畅,从而影响峰形。此时可以进行反冲操作,冲洗掉柱头的污染物。
柱头的筛板可能被堵或柱头塌陷,导致样品分子不能均匀通过色谱柱,形成不对称的峰形。更换或清洗筛板可能有助于解决问题。
样品溶剂与流动相极性差异大:
如果样品溶剂的极性与流动相存在较大差异,可能会导致峰形问题。可以尝试降低溶剂的乙腈比例,以减小极性差异带来的影响。
方法选择不当:
需要判断峰形问题是单个峰的问题还是所有峰的普遍问题。如果是单个峰的问题,可能需要从方法上考虑,比如改变流动相比例、pH值或色谱柱温度等。
仪器管路连接问题:
如果所有峰都有问题,可能是色谱柱或仪器管路连接的问题。检查并确保所有连接正确无误,无泄漏或堵塞现象。
保护柱和色谱柱老化:
保护柱和色谱柱随着时间的推移可能会老化,导致分离效果下降。定期更换保护柱和色谱柱有助于维护仪器性能。
样品前处理不当:
样品上机前的前处理不当可能会导致杂质进入系统,影响峰形。确保样品前处理过程准确无误,避免引入污染。
泵密封圈磨损:
泵密封圈如果磨损,可能会导致流动相流量不稳定,影响峰形。及时更换磨损的泵密封圈是必要的。