1. 调试和校准
流式细胞仪在使用前,甚至在使用过程中都要精心进行调试,以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。
激光强度:除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外,还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。
液流速度:可通过操作台数字显示监督,调节
气体压力大小以获得稳定的液流速度。
测量区光路调节:这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交,而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。
2. 仪器的操作和使用
①打开电源,对系统进行预热;
②打开气体阈,调节压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;
③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;
④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;
⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;
⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;
⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;
⑧将所需结果打印出来。