在液相色谱分析中,标准曲线的建立是量化分析的关键步骤。合理选择标准溶液的浓度范围和各个浓度点对于确保分析的准确性和可靠性至关重要。以下表格提供了一个示例,展示如何在液相色谱中标曲中选择各个浓度点:
浓度点 (μg/mL) | 分析物预期浓度范围 (μg/mL) |
---|---|
0.1 | 低浓度范围 |
0.5 | 低至中等浓度范围 |
1.0 | 中等浓度范围 |
5.0 | 中等至高浓度范围 |
10.0 | 高浓度范围 |
1,先用对照品测检测限,起始浓度一般为1mg/10ml(基本也算最高浓度)。信噪比10就是定量限,标曲的最低浓度需要高于定量限。
2,预实验一批样品,大概计算一下浓度,样品中最高浓度和最低浓度必须在标曲范围内,标曲5个点,差不多就是样品最低浓度就设计在第4点,最高浓度设计为第2点。点1浓度最大,点5浓度最小。尽量取整数,尽量用等比数列。
3,如果样品最低浓度低于定量限,要不就按没有计算,要不就更改前处理方法,浓缩提高浓度。
做临床样本中的小分子代谢物为例
首先会查阅分析物的临床决定水平,因为所有物质的检测都有一个终端目标,小分子代谢物终端应用是检测临床样本,那么就需要知道该物质在人体中的正常浓度水平是多少。其他应用领域也是同理。
然后会根据临床决定水平建立初步的线性范围,范围通常会包含决定水平的上限和下限,因为通常认为线性范围以外的定量结果准确度不够。线性范围下限通常会选择定量限(信噪比10)浓度的至少4-5倍以上(但也要考虑到检测灵敏度),且测量浓度应为理论浓度的±20%偏差以内(其他点的偏差不超过±15%)。
浓度点应不少于5个,且线性相关系数r>0.99。具体内容可以参考分析方法验证指导原则,里面有说明一条合格的标曲应符合哪些标准。