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如果流速太快,分子小的物质来不及扩散,会随着分子大的物质一起被洗脱下来,达不到分离目的;如果流速太慢,大分子物质的下沉的速度与小分子差不多的话,同样达不到分离的目的。
梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。