免疫亲和柱荧光计快速测定法
(1)试剂与设备
①4-系列真菌毒素专用荧光计。
②均质器(250mL)。
微量移液器(0.5mL)。
涡流混合器。
⑤塑料注射器(60mL)。
⑥VICAM T-2毒素亲和柱。
⑦聚乙二醇(PEG),相对分子质量8000。
色谱级甲醇。
⑨PBS缓冲液。
⑩氯化钠。
⑪VICAM T-2毒素衍生液。
⑫VICAM T-2毒素标定用溶液(红色)。
⑬0.02%吐温/PBS 缓冲液:0.1mL 吐温+9.99mL PBS 缓冲液+490mL 水。
(2)样品的提取与过滤
①称取50g 样品、5g 氯化钠、10g PEG 置于均质杯中。
加入150mL 25%的甲醇,高速均质1min。
③用折叠式滤纸过滤,用干净的烧杯收集25mL的滤液。
④用25mL 的水将滤液稀释1倍。
⑤将 T-2毒素亲和柱与60mL 塑料注射器筒相连。
⑥将40mL T-2毒素标定用溶液加入至塑料注射器筒中。
(3)样品的制备与培养
①在塑料注射器筒中加入0.5mL 的T-2毒素衍生液。
②将塑料注射器筒从操作架上取下,用硅橡胶塞子塞好,翻转混合4～5次,然后再置于操作架上。
(4)色谱柱分离操作与测定
①将空气泵与亲和柱相连,使注射器中的溶液以1～2滴/秒的速度通过亲和柱。
②用0.02%吐温/PBS 缓冲液以1～2滴秒的速度通过亲和柱。
③用2mL 色谱级的甲醇以1滴/秒的速度通过亲和柱,滤液收集于测试管中。
④将测试管置于荧光计中进行测定。
⑤检测限:0.15mg/kg,测定范围0～5.0mg/kg。
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