实验分析方法--高效亲和色谱固定相的相关介绍

亲和色谱(AFC)是利用生物分子之间特异性相互作用实现分离的液相色谱分离模式亲和色谱是一种特异性的分离技术,这种特异性相互作用是活性生物大分子固有的特征,例如酶能与底物、抑制物、辅酶等结合;抗体能与互补的抗原相结合;凝集素能与细胞的表面抗原以及某些糖类相结合;激素能与蛋白及细胞受体形成复合物;基因可与核酸和阻遏蛋白相互作用等。亲和色谱以其极高的选择性不可替代地应用于复杂生物体系的分离分析中。

传统亲和色谱多使用天然或合成高分子载体(葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等),机械强度差,难以提高淋洗速度。高效亲和色谱采用可控孔径硅胶、可控孔径玻璃等无机基质,机械强度高且易于通过各种化学键合而増加配基牢度,具有很好的应用前景。有机聚合物基质主要有多糖型和高聚物型两大类。无机基质的主要缺陷为耐受pH值范围较窄(pH=2~8),并且残余硅羟基可造成非特异吸附而降低收率,甚至导致产品失活。

按照亲和色谱配体性能即固定相所携带配体对被分离物质的选择性特征,可分为专用性和通用性两大类。就亲和配体的连接方式而言,既可以将配体与基质直接偶联,也可以在基质与配体之间插入一适当长度的链状间隔臂间接连接。由于适当的间隔壁链段可以有效地克服基质表面的几何位阻效应,使得配体更容易与被分离物结合,通常带有间隔臂的AFC固定相往往具有更为优异的色谱性能。对于以小分子为配体分离大分子的亲和固定相来说,间隔臂的作用显得更为重要。AFC固定相的间隔臂主要包括烃类、链状的聚胺类、肽类、链状聚醚类等。