材料与试剂
1、琼脂粉
2、平皿
3、打孔器
4、生理盐水或其他缓冲液,可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。
操作方法
1、称取一定量的琼脂粉,按1%左右(0.8%~1.5%)的比例加入生理盐水或缓冲液,水浴煮沸融化20min。
2、将融化的琼脂倒入平皿内,使厚度2mm~3mm。自然冷却。
3、根据要求(孔径即孔的直径,孔距即两孔圆心之间的距离,包括两孔的半径)按模板打孔。也可直接用组合打孔器打孔。现在一般多打成梅花形孔图。
4、挑出孔内琼脂,注意不要挑破孔缘。
5、在火焰上缓缓加热,使孔底边缘的琼脂少许熔化,以封底,以免加样后液体从孔底渗漏。
6、以毛细滴管吸取样品加入孔内,注意不要产生气泡,以加满为度。加少了,影响反应程度,加多了,易溢出,也影响反应结果。
7、加毕后,盖上平皿盖,将平皿翻过来,置湿盘中,37℃自由扩散24h~48h。