1、产后新鲜脐带,无菌剪取 10—15 厘米长一段,如不能立即培养,可于 12 小 时内保存于 4℃。
2、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧, 以防液体返流。
3、用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中徐徐注入浓度为 0.1%的粗制胶原酶,充满血管,消化 3—10 分钟;注入口用线绳扎,以防液体返流。
4、吸出含有内皮细胞的消化液,于离心管中,注入温 PBS 轻轻反复冲洗后,一 并注入离心管中(此步骤可重复) 。
5、离心去上清,加入RPMI1640培养液制成细胞悬液,接种入培养器皿中,置温 箱培养。两至三天可见细胞长成单层。
神经细胞(神经元)不易培养,只有在适宜情况下,如接种在胶原底层上,或加入神经生长因子和胶质细胞因子时,可出现一定程度的分化,长出突起等现象, 但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养,不仅能获得生长的胶质细胞,也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来,胶质细胞在培养中生长不稳定,不易自发转化,但对外界因素仍保持很好的敏感性,可用 ROUS病毒和SV4等诱发转化。