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转膜后,膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。
在做Western blot实验中,会用到固相载体(如NC膜,PVDF膜),在这些固相载体表面有很多洞洞,通过电转,胶上的蛋白被转移到膜上,蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。
蛋白塞进了表面的很多洞洞里面,但是蛋白并不是连续的,而有很多空隙,抗体也是蛋白,也会被吸附在空的洞里,这样就会有很多非特异性的信号。