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鞣酸化红细胞试验红血球的处理

2022.4.13
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  1.新鲜红血球新鲜红血球用阿氏液保存于4℃,可供3周内使用。采用新鲜红血球做凝集反应,模型新鲜,典型,而且敏感性也比醛化红血球高出1~2个滴度。但用新鲜红血球致敏后,保存时间短,而且不同动物个体和不同批次来源的红血球均有差异,影响试验结果和分析。为了克服这一缺点,多采用醛化红血球或鞣化红血球。

  2.红血球醛化极其优点

  (1)醛化方法:常见的醛化剂有甲醛、戊二醛和丙酮醛。

  甲醛醛化过程:①将红血球用pH7.2PBS反复洗涤4次,以除去血清蛋白以及红血球表面的胶体物质;②按1︰8的比例取红血球(压积)和3%甲醛液(用pH7.2PBS稀释,预先冷却至4℃),缓慢混合,加胶塞4℃作用24h,不时摇动;③倾去上清液,再以1︰2(V/V)加入36%~38%冷的(10℃)甲醛溶液,混匀,再放入4℃24h;④⑷离心去上清,以生理盐水反复洗涤4次。彻底清除甲醛液,最后以生理盐水配成10%悬液甲醛化红血球,加1/万硫柳汞防腐,4℃保存。

  戊二醛醛化过程:①取新鲜红血球,以生理盐水洗涤4次;②以0.15Mol/L pH 7.2 PBS配成1%戊二醛溶液,4℃保存备用;③将100ml 1%冰冷的戊二醛液加入到10ml~15ml红血球中,边加边搅拌(也可置电磁搅拌器上)30min;④离心去上清,以生理盐水洗涤4次,最后以PBS液(或生理盐水)配成10%悬液,加1/万硫柳汞,4℃保存。

  丙酮醛—甲醛双醛化过程:①取新鲜红血球,洗涤4次,配成8%的悬液;②于红血球悬液中加等量的3%丙酮醛室温电磁搅拌16h~18h;③洗涤5次,再配成8%的悬液;④于红血球悬液中加等量的3%甲醛,电磁搅拌16h~18h;⑤洗涤5次,最后以pH 7.2 PBS配成10%的悬液,加1/万硫柳汞防腐,4℃保存。

  (3)醛化红血球的优点:①性质稳定,不影响红血球表面的吸附能力;②重复性好,易标准化。③可较长期保存,醛化后4℃保存,有效期可至1年,如冻干保存,有效期则更长。

  (4)影响醛化的因素:①红血球的洁净程度:由于红血球表面残留血浆蛋白和其它胶质,易引起自家凝集,所以一定要充分洗净;②红血球的浓度:醛化时应尽量使红血球稀释度低一些,以减少红血球的凝集和变形;③醛化时的温度与醛化红血球的质量有很大关系,一般认为最好是37℃。但有人认为应于4℃进行醛化;④醛化剂的浓度和醛化次数:醛化剂的浓度过大,易引起红血球皱褶,浓度过低,又会增加溶血机会,所以一般以3%醛化浓度为宜。家禽红血球一般醛化1~2次即可,而哺乳动物红血球醛化2次比醛化1次要好,敏感性高,保存时间也长。不同的双醛化,其抗原致敏作用有所不同。

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