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在反相键合相色谱中，键和固定相的极性小与流动相的极性，适用于分离非极性、极性低的化合物。在反相键合相色谱法色谱柱中使用的是非极性键和固定相，它是将全多孔微粒硅胶载体，经酸活化处理后与含烷基链或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基的非极性固定相。目前，最常用色谱柱是采用十八烷基硅烷键合固定相，流动相为强极性溶剂水、甲醇、乙腈等。
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