门冬酰胺酶（埃希）的鉴别和检查方法

鉴别

(1)取本品5mg,加水1ml使溶解,加20%氢氧化钠溶液5ml,摇匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,摇匀,溶液应显蓝紫色(2)照高效液相色谱法(通则0512)试验供试品溶液取本品适量,加流动相A溶解并定量稀释制成每1m1中约含1mg的溶液。对照品溶液取门冬酰胺酶（埃希）对照品,加流动相A溶解并定量稀释制成每1m1中约含1mg的溶液。色谱条件用辛基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm250mm);以0.05%三氟醋酸溶液为流动相A,以三氟醋酸40%乙腈溶液(0.5:1000)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;流速为每分钟1ml;检测波长为220nm;进样体积20l时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)010075测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图结果判定供试品溶液色谱图中主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致

检查

酸碱度取本品,加水溶解并稀释制成每1m中含10mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为6.5~7.5。溶液的澄清度与颜色取本品,加水溶解并稀释制成每nl中含5mg的溶液,依法测定(通则0901第一法和通则0902第一法),溶液应澄清无色纯度照分子排阻色谱法(通则0514)测定。供试品溶液取本品适量,加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液色谱条件用适合分离分子量为10000~500000球状蛋白的色谱用亲水改性硅胶为填充剂;以0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.7)(取磷酸二氢钠6.0g、磷酸氢二钠20.2g,加水900ml,用磷酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6.7,加水至1000ml)为流动相;流速为每分钟0.6ml;检测波长为280nm进样体积20p测定法精密量取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图。限度按峰面积归一化法计算主峰相对百分含量,应不得低于97.0%。干燥失重取本品0.1g,置105℃干燥3小时,减失重量不得过5.0%(通则0831)。重金属取本品0.5g,依法检查(通则0821第二法),含重金属不得过百万分之二十异常毒性取本品,照注射用门冬酰胺酶（埃希）项下的方法检查,应符合规定。细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1单位门冬酰胺酶（埃希）中含内毒素的量应小于0.015EU。降压物质取本品,依法检查(通则1145),剂量按猫体重1kg注射1万单位,应符合规定