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100-500ng/uL。质粒转化不少于10的5次方，连接产物不少于10的6次方。
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的，比如构建腺病毒载体时。但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞，转化效率非常低，一般需要电转或者其他的特殊处理。增加收菌次数，相对提高了质粒的量，这样的话裂解液的量可以适当增加；裂解要充分，变性和复性按说明应该是不超过5分钟，合理控制时间。
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