1、吸光度
取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中含1.88mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，在280nm与325nm的波长处，吸光度均不得大于0.10，在264nm的波长处有最大吸收，吸光度应为0.80~0.88。
2、有关物质
照高效液相色谱法（通则0512）测定，临用新制。
供试品溶液：取本品适量，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含4mg的溶液。
对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
系统适用性溶液：取青霉素系统适用性对照品适量，加水溶解并稀释制成每1mL中约含4mg的溶液。
灵敏度溶液：精密量取对照溶液适量，用水定量稀释制成每1mL中约含1.0µg的溶液。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾10.6g，加水至1000mL，用磷酸调节pH值至3.4）-甲醇（72:14）为流动相A，乙腈为流动相B，先以流动相A-流动相B（86.5:13.5）等度洗脱，待杂质E的第3个色谱峰（见参考图谱）洗脱完毕后，立即按下表进行线性梯度洗脱，检测波长为225nm，流速为每分钟1.0mL，柱温为34℃，进样体积为20µL。
tg：青霉素系统适用性对照品溶液中杂质E的第3个色谱峰的保留时间。
系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图应与标准图谱一致，灵敏度溶液色谱图中，主成分色谱峰峰高的信噪比应大于10。
测定法：精密量取供试品溶液和对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%），小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。
3、青霉素聚合物
照分子排阻色谱法（通则0514）测定，临用新制。
供试品溶液：取本品约0.4g，精密称定，置10mL量瓶中，加水适量使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。
对照溶液：取青霉素对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液。
系统适用性溶液（1）：取蓝色葡聚糖2000适量，加水溶解并稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液。
系统适用性溶液（2）：取青霉素钾约0.4g，置10mL量瓶中，加0.05mg/mL的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
色谱条件：用葡聚糖凝胶G-10（40~120μm）为填充剂，玻璃柱内径为1.0~1.4cm，柱长为30~40cm，以pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（61:39）]为流动相A，以水为流动相B，流速为每分钟1.5mL，检测波长为254nm，进样体积为100~200μL。
系统适用性要求：系统适用性溶液 (1) 分别在以流动相A 与流动相 B 为流动相记录的色谱图中 ， 按蓝色葡聚糖2000 峰计算，理论板数均不低于 400 , 拖尾因子均应小于 z. 0, 蓝色葡聚糖 2000 的保留时间的比值应在 0. 93 -1.07 之间。系统适用性溶液 (2) 在以流动相 A 为流动相记录的色谱图中，高聚体的峰高与单体和高聚体之间的谷高比应大于 2.0 。对照溶液色谱图中主峰与供试品溶液色谱图中聚合物峰，与相应色谱系统中蓝色葡聚糖 2000 峰的保留时间的比值均应在0.93~1.07之间。以流动相B为流动相，精密量取对照溶液连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。
测定法：以流动相A为流动相，精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，以流动相B为流动相，精密量取对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
限度：按外标法以青霉素峰面积计算，青霉素聚合物的量不得过0.08%。
4、可见异物
取本品5份，每份各0.625g，加微粒检查用水溶解，依法检查（通则0904），应符合规定。（供无菌分装用）
5、不溶性微粒
取本品，加微粒检查用水制成每1mL中含50mg的溶液，依法检查（通则0903），每1g样品中，含10µm及10µm以上的微粒不得过6000粒，含25µm及25µm以上的微粒不得过600粒。（供无菌分装用）
结晶性、酸碱度、溶液的澄清度与颜色、干燥失重、细菌内毒素（供注射用）与无菌（供无菌分装用）
照青霉素钠项下的方法检查，均应符合规定。
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