玉米作为酒精生产的主要原料在国内外都得到了普遍的应用。目前，为简化生产工艺，便于工业化生产，世界范围内普遍采用添加液化酶和糖化酶即所谓双酶法的生产工艺。此种生产工艺根据液化温度不同，有高温和低温之分，高温法生产酒精不但水、电、汽消耗量较大，而且由于在高温蒸煮过程中原料里的果糖会转化为焦糖，阻碍糖化酶对淀粉的作用，影响酵母的生长，进而影响酒精的产量。本实验的目的在于探讨并优化低温双酶法玉米酒精生产工艺。
1 材料与方法
1.1 材料
原料：（市售）玉米粉；液化酶：耐高温a－淀粉酶，20 000 U/m1；糖化酶：β－淀粉酶，80 000 U/m1；酵母菌：安琪牌高温酒精活性干酵母。
1.2 双酶法玉米酒精生产工艺流程
液化酶 糖化酶 酵母菌
↓ ↓ ↓
玉米粉→加水→液化→糖化→发酵→蒸馏→成品酒精
1.3 检测方法
外观糖度：手持糖度仪。
还原糖、酒精.含量测定：参考文献。
2 结果与讨论
2.1 液化工艺条件的确定
取100g玉米粉，加入300ml的水，同时加入液化酶，充分搅拌后，水浴加热，以液化温度、pH值、时间、液化酶添加量为讨论因素，根据所选用酶的作用条件范围各取3个水平，拟定液化因素水平表，因素水平表见表1。
按照拟定的因素、水平，设计正交实验L9（34），液化效果以物料的粘度为依据，对数据进行极差法分析，进而确定最佳的液化工艺条件。实验数据与处理结果见表2。由表2中的极差分析结果可以看出对液化影响最大的因素是液化时间（S=112 338.89），液化温度次之，液化酶的添加量又次之，pH值的影响最小。根据表2中的数据，可以确定液化的最佳工艺条件为：液化温度90℃，pH值5.5，液化时间3.5 h,液化酶的添加量为0.035 g/100 g玉米粉。
2.2 糖化工艺条件的确定
按照2.1中得到的最适液化条件，以100 g玉米粉为原料进行液化，将液化得到的醒液冷却到设定的糖化温度后，加入糖化酶，保温进行糖化，以糖化温度、PH值、糖化时间、糖化酶添加时为讨论因素，各取3个水平，确定糖化因素水平如表3。
按照拟定的因素、水平，设计正交实验L9（34），糖化效果以实验得到的还原糖含量为依据，对实验数据进行极差法分析，用以确定最佳的糖化工艺条件。实验数据与处理结果见表4。
由表4中的极差分析结果可以看出，对糖化影响最大的因素是糖化时间（S=52.57），时间长则还原糖含量增大；pH值的影响次之，糖化酶的添加量又次之，液化温度对糖化结果的影响最小。
根据表4中的数据，可以确定糖化的最佳工艺条件为：糖化温度58℃、pH值4.5、糖化时间2.5 h,糖化酶的添加量0.3扩100g玉米粉。
2.3 酒精发酵
利用实验2.1、2.2确定的最佳液化和糖化工艺条件进行玉米粉的液化和糖化，然后降温至38℃，接入0.05%的干酵母搅拌均匀，发酵48h，对发酵液进行测定，实验结果见表5。
3 结论
采用正交实验，确定了液化的最佳工艺条件为：液化温度90℃、pH值5.5，液化时间3. 5 h,液化酶的添加量为0.035g/100玉米粉。通过低温液化，可达到液化的要求。
通过正交实验，确定了糖化的最佳工艺条件为：糖化温度58℃、pH值4.5,糖化时间2.5 h，糖化酶的添加量为0.3g/100玉米粉。
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