色谱柱参数内容回顾
1
方法规定的键合相是什么？哪种键合相（以及分离模式）会比较合适？
2
色谱条件是什么？如在高盐流动相或高温条件下，什么样的填料基质或键合方式会比较耐用？
3
分析物的分子量范围是多少？需要根据分子量大小选择不同孔径吗？
4
检测任务繁重，需要提高分析速度或检测通量吗？
5
全多孔颗粒VS实心核（表面多孔）颗粒，载量高VS柱效高，如何根据项目情况来进行选择？
提到速度与通量，越来越多的分析人员追求更高的效率，也越来越青睐短小高效的色谱柱。可是，实验室摆满了不同规格大大小小的色谱柱，也挤满了不同品牌、不同时期的仪器系统，从HPLC、到UHPLC、甚至UPLC，都无所不包。
很多分析人员，只知道色谱柱的耐压能力要与系统的日常运行压力相匹配，却不知道系统还会影响柱效和分离度。这导致大家在日常使用中，常常发生因为色谱柱与仪器的匹配不佳而使得分析结果不理想、项目速度受到影响的情况，如下图：相同色谱柱相同色谱条件在不同仪器上测试结果差异明显。
今天，我们针对这个典型问题，好好解说解说。
柱规格，指色谱柱的内径及长度，如常规在HPLC仪器上使用的4.6×250 mm色谱柱，其中4.6是柱内径，250是色谱柱柱长。
不同规格的色谱柱，要用在与之相匹配的系统上，才能发挥出应有的效果。从下图中可以看到，对相同长度的色谱柱，柱内径减小时，可选用的仪器平台会受到限制，如2.1×50 mm色谱柱，仅在UPLC系统上才能发挥出其应有的柱效。
这是因为色谱柱体积越小，越容易受到系统扩散体积的影响。系统扩散体积，也就是我们常说的死体积，是指从进样器开始、直至检测器之间，除了色谱柱本身以外，样品所有流经的路程。样品在这些通道中不断的扩散，色谱图上表现为峰展宽，随之峰高降低，分离度也因此变差。
如下图所示，不合适内径和长度的连接线以及不正确的连接均会产生死体积，导致峰形欠佳。
系统死体积测试方法
谱带展宽测定应当在配有检测器的液相色谱系统上进行。
1）断开色谱柱与系统的连接并替换为零死体积二通。
2）将泵系统的流速设置为1 mL/min。
3）使用的测试混合物(在流动相条件下溶解)其最大峰高响应值应低于0.5 AU。
4）进样此溶液2-5 μL。
5）采用5-Sigma法测量4.4%峰高处的峰宽(分钟)。
谱带展宽(μL)=峰宽(min)×流速(μL/min)
(例如，如果峰宽=0.1 min，流速=1000 μL/min。那么谱带展宽=100 μL）
知识小结
1）当您的色谱柱越“大”——柱规格较大，它对液相系统就不那么“挑剔”；
2）当您的色谱柱看起来越小——比较细，或者比较短，或者兼而有之，如果您的项目还比较难分，一定要把色谱柱放在死体积较小的系统上使用，同时还要特别注意连接色谱柱时不要造成额外死体积；
3）可以参考如下，作为系统与色谱柱选配的指导。
说明：
1.因印刷版数量有限，若同一部门多人需要，我们将与您联系核实。
2.若您负责多个实验室、需要多张挂图，请在申请时备注，我们将与您联系。
往期回顾
► 色谱柱的使用（五）解读C18的技术参数（下）
► 色谱柱的使用（四）解读C18的技术参数（中）
► 色谱柱的使用（三）解读C18的技术参数（上）
► 色谱柱的使用（二）极性农药分析专用柱Torus DEA 的使用技巧
► 色谱柱的使用（一）HILIC模式色谱柱的原理与维护
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