mRNA疫苗
探索之路
百年研发,道阻且长
疫苗的研发之路是非常不确定和漫长的。从最早的上个世纪20年代的卡介苗开始,到现在已有百年,能成功广泛应用的疫苗也仅仅有十个大类及其衍生的品种如多价苗、结合苗、联合苗。疫苗的形式也从最早的灭活减毒、全病毒逐渐增加到裂解苗,亚单位疫苗,及随着层析技术的发展出现的多糖苗、多糖结合苗、蛋白基础的多联苗。
21世纪开始新型疫苗的研发开始如火如荼,出现了病毒载体疫苗,VLP疫苗及最近非常被提及最多核酸疫苗及mRNA疫苗。由于疫苗在能够保护健康人免于感染流行病的同时还需要评估其他副作用,这个常常导致很多流行病疫苗难以成功的研制,特别是安全性和保护性,在临床上评估时间长,投入大,研制周期无法赶上流行病爆发,这是传统疫苗难以开发成功的最大原因。
核酸疫苗,异军突起
1990 年,一种新型疫苗的雏形问世——核酸疫苗,包含 DNA 疫苗和 mRNA 疫苗。相比之下,核酸疫苗在研发进度和生产速度上具有更大的优势,当然我们抛开有效抗原寻找这一方面暂时不谈。核酸疫苗具有较强免疫原性和更高免疫效率,且构建周期短、生产技术简单、运输成本低、储存方便,使其成为应对重大 突发性传染疾病 的潜在有力手段。
特别是 mRNA 疫苗,临床时间要比普通抗原免疫反应机理的疫苗需要的时间短,产业化容易,速度快,成本低,免疫效果持久,安全性高,甚至可以往个性化治疗方向发展。随着近年 mRNA 疫苗平台的不断完善,mRNA 疫苗将有望在防治领域获得迅猛发展。
图 1 对比几种不同的疫苗类型特点
赳赳武夫,民众干城
图 2 mRNA 疫苗领军者:研究方向及其治疗平台
(参考文献:mRNA vaccines – a new era in vaccinology,Nature review: drug discovery,2018)
目前,有两种主要形式的 mRNA 疫苗:
1. 非复制(non-replicating) 型·mRNA分子·(~2kb)
2. 自扩增(self-amplifying)型·mRNA分子·(~ 10kbp)
图 3 全长的 mRNA 结构图示
(参考文献:mRNA therapeutics deliver a hopeful message,NaNo Today,2018)
塑我工艺,修子甲兵
mRNA 疫苗生产工艺流程
1. pDNA 的制备
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2. 体外转录
通过线性化 pDNA 或 PCR 模板的体外转录(IVT)产生的,该模板含有噬菌体启动子,5 UTR,开放阅读框(ORF),3 个非翻译区(UTR)通过 IVT 生成合成 mRNA。通常加入底物,引物,NTPs,酶等成分。
3. mRNA 制备(扩增型/非扩增型
① 澄清;
② 快速提取:Oligo dT 纯化柱/或者相关磁珠产品;
③ 精细纯化(AIEX 阴离子):Capto Q impres/SOURCE 15Q。
除去酶、游离核苷酸、残留 DNA 和外源 RNA 片段,dsRNA, 及反应体系中的免疫原性杂质。满足 GMP 生产的质量需求。
4. 无菌过滤/制剂
① 除菌过滤;
② 制剂与载体结合,常用载体树突细胞,鱼精蛋白,微质粒载体和高分子载体等;
③ 或者直接注射,不结合载体。
岂曰无衣?与子同袍
战疫情,助开发
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