一背景
奶牛乳房炎是困扰奶牛养殖业三大疾病(乳房炎、子宫炎、肢蹄病)之首。奶牛乳房炎是由于奶牛乳腺组织受到物理、化学、微生物刺激所发生的一种炎性反应。根据导致奶牛乳房炎病原微生物分离培养方面的资料显示,引起乳房炎的病原菌主要以金黄色葡萄球菌、链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌为主,占到引起乳房炎病院的90%左右。
奶牛乳房炎至今发病率仍相当高,广泛存在于世界各地,不仅降低奶牛产奶量和乳品质,给奶牛饲养业造成巨大经济损失,严重威胁奶牛业的发展,而且还影响到乳品食用者的健康。
及时准确地对奶牛乳房炎做出早期诊断,不仅可以保证奶牛的健康,也降低了牛奶的生产成本,避免抗生素滥用所造成的的乳制品安全问题。
如何对奶牛的乳房炎进行检测和诊断呢?
二
牛奶体细胞
体细胞数简称为SCC,通常以每毫升牛奶千个细胞来计数。近年来很多国家将体细胞数( SCC ) 作为原料奶收购的标准之一 。影响牛奶体细胞数的因素很多。一般来说,传染性乳房炎是微生物引起体细胞数增加的主要原因。当乳房外伤或发生疾病产生炎症时,机体将大量的白细胞分泌进入乳房以清除感染。
牛奶体细胞数不可能为零,但多数牛群可以将牛奶体细胞数控制在15万以下,这就表明牛群隐性乳房炎发病率很低,乳腺组织损伤小,产奶量高,牛奶质量好。 因此,可以通过检测乳汁中体细胞的多少来判断奶牛是否患有乳房炎,尤其对隐性乳房炎的检测非常实用有效。绝大多数专家、兽医认为,体细胞数在20万个/mL以内为正常。
而且随着牛奶中体细胞数增加,牛奶中不受欢迎的脂肪酶及血纤维蛋白酶含量增加。脂肪酶分解脂肪,产生酸败气味,阻止酸奶乳酸菌繁殖,并且减少奶制品存储时间。血纤维蛋白酶减少牛奶中酪蛋白含量,并且减少干酪产量。即使在冷藏条件下,这些酶仍然发挥作用。体细胞数增加还会使牛奶中的营养成分如乳脂、蛋白质、乳糖明显下降。
牛奶体细胞数的检测
(1)基于流式细胞原理的牛奶体细胞快速测定仪(如PerkinElmer公司的CombiScope型体细胞分析仪):其工作原理是利用流式细胞计数(Flowcytometry)技术将被测定的细胞染色并置于悬浮液体之中,然后强迫细胞逐一通过一个非常窄小的缝隙管道。同时,向其发出特殊光束,使得每一个染色后的细胞在通过测定点时也发出回应光束脉冲信号,采用电子技术,再将其脉冲信号记录下来。利用电脑将所记录的脉冲信号处理,从而达到对牛奶中细胞自动计数。
Combiscope型体细胞分析仪
(2)CMT试验:将被检牛的4个乳区的乳,分别挤在诊断盘的4个小室内,倾斜诊断盘,倒出多余乳,使每个小室内保留乳汁2毫升,分别加入2毫升试剂于小室内,呈同心圆摇动诊断盘,最后判定结果。
流式细胞技术(如PerkinElmer公司的CombiScope型体细胞分析仪)和CMT试验是目前临床上最常用的牛奶体细胞测定方法。流式细胞技术测定的一般是奶牛四个乳头的混合奶样,因而不能决定哪一个乳头感染;CMT试验操作简单,价格便宜,能够快速判断那个乳头感染。
三
奶牛乳房炎致病因子检测
引起乳房炎的病原菌有很多种,当知道奶牛患乳房炎后,为了更好的治疗,需要及时准确地对奶牛乳房炎致病因子进行检测。
传统的细菌生化实验操作复杂、耗时耗力。因此研发出一种操作简单、快速省力方法,成为奶牛养殖业的需求,符合当前发展形势。
良润生物提供奶牛乳房炎鉴定平板和核酸检测试剂盒两种检测手段。
1
奶牛乳房炎鉴定平板
原理>▷
在分离培养基中加入检测某些菌种的特异性酶底物,该底物为人工合成,由发色基团和微生物可代谢物质组成,通常为无色,但在特异性酶作用下游离出发色基团并显示一定颜色,直接观察菌落颜色即可对菌种做出鉴定。
操作步骤>▷
•样本采集
•平板划线
•培养判读
优势>▷
_
传统方法
鉴定平板
时间
3-5天
18-24H
培养基种类
种类繁多
仅需一种(双格板/三格板)
结果判读
不易简单
分离检测到种
否是
试验步骤
繁琐
简单,易操作
用药指导
宽泛
精准治疗
奶牛乳房炎鉴定平板结果显示
2
核酸检测试剂盒
原理>▷
实时荧光PCR技术,针对奶牛乳房炎病原菌的特性基因设计引物探针,实现核酸水平上的定性检测。
操作步骤>▷
•样本采集
•核酸提取
•上机检测
优势>▷
参数
细菌培养
PCR
检测样本
细菌菌落
DNA(细菌、真菌、支原体)
毒力因子检测
有局限性(如溶血素)
适用于存在PCR引物
影响因素
培养基和生长条件;培养时间;接种量/检测限;结果解释
引物;引物特异性;CT阈值;结果解释
操作便利性
前期操作简单,后期确定步骤多
需要配套仪器,操作要求高
结果解释
得到的菌株需要生化或者分子等方法确认
确认方法
时间
24h到10d
2-4h
成本低
常规培养法的4到5倍
检测项目
7-9种
16种以上,检测项目多
产品列表>▷
产品名称
产品编号
产品规格
细菌基因组DNA提取试剂盒
LR79003
50T/盒
金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-005
50T/盒
葡萄球菌属核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-006
50T/盒
无乳链球菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-007
50T/盒
停乳链球菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-008
50T/盒
乳房链球菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-009
50T/盒
大肠埃希氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-010
50T/盒
肠球菌属核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-011
50T/盒
克雷伯菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-012
50T/盒
牛棒状杆菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-013
50T/盒
粘质沙雷菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-014
50T/盒
化脓隐秘杆菌和吲哚嗜胨菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-015
50T/盒
葡萄球菌β-内酰胺酶基因检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-016
50T/盒
牛支原体核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-017
50T/盒
支原体属核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-018
50T/盒
酵母菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-019
50T/盒
原壁菌属核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-020
50T/盒
16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-021
50T/盒
奶牛乳房炎病原菌(无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、牛支原体)三联检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-D0011
50T/盒
奶牛乳房炎病原菌4联核酸检测试剂盒1(PCR-探针法)
BMT-D0012
50T/盒
奶牛乳房炎病原菌4联核酸检测试剂盒2(PCR-探针法)
BMT-D0013
50T/盒
奶牛乳房炎病原菌8联核酸检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-D0014
50T/盒
奶牛乳房炎病原菌12核酸联检测试剂盒(PCR-探针法)
BMT-D0015
50T/盒
革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌鉴定平板
BMT-3001
20T/盒
金黄色葡萄球菌/B族链球菌鉴定平板
BMT-3002
20T/盒
牛支原体分离平板
BMT-3003
20T/盒
乳房炎致病菌鉴定平板 1
BMT-3004
20T/盒
乳房炎致病菌鉴定平板 2
BMT-3005
20T/盒
乳房炎致病菌鉴定平板 3
BMT-3006
20T/盒
乳房炎致病菌鉴定平板 4
BMT-3007
20T/盒
下期聊聊乳制品中脂肪酸的检测
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